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转染效率快速评估选它——LUNA FL全自动细胞计数仪

【字体: 时间:2020年08月17日 来源:基因有限公司

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  Luna FL全自动细胞计数仪整合了用于明场信号和荧光信号检测的光学模块,同时将荧光显微术与图像分析软件紧凑的结合,可进行GFP转染效率的评估。

转染是指将外来遗传物质引入真核细胞的过程。目前,虽然已经开发了许多转染方法,但是无论使用哪种方法,转染效率都达不到100%。尽管可以通过构建稳定转染细胞株的的方法缓解该问题,但是前期瞬时转染的转染效率的差异是比较大的。为了比较从不同实验获得的结果,研究人员需要在每次进行瞬时转染时确定转染效率。一种简单而流行的评估转染效率的方法是使用GFP报告基因,通过检测GFP蛋白的表达来评估目的基因的表达。

Luna FL全自动细胞计数仪可简单、快速的进行GFP转染效率的评估。它整合了用于明场和荧光场检测的光学模块,将荧光显微技术与图像分析软件相结合,不仅支持台盼兰染色/非染色的明场计数,还支持荧光场如AO/PI染料的细胞计数和活性检测,酵母细胞的计数和活性检测,还可进行GFP转染效率的评估。
 
用Luna FL测定GFP转染效率,首先需要分析阴性对照样品,阴性对照可以是未转染的对照或模拟转染的对照。通过该步骤,测量细胞系的背景荧光。接下来,分析实验样品,发出比背景强度强的荧光的细胞被认为是“阳性的转染细胞”。使用Luna FL进行GFP转染效率评估有众多的优点:价格合理,不需要专门培训,不需要专门的操作员,仪器无需维护,准确性高,以及适用于更具有挑战性的样品检测。

接下来我们看一下它是如何进行转染效率评估吧?

步骤一:样品制备、加样

先将10 µL阳性样品加到芯片样品孔中。

步骤二:打开Luna FL电源、插入芯片

将芯片完全插入芯片槽,静置10sec-1min,确保细胞沉降下来,所有细胞不再移动。

步骤三:调节曝光强度

将阳性细胞样品加到样品孔中,选择 “GFP Transfection Assay” 选项,出现预览视野,预览为明场视野,在2x或4x下进行焦距调节;点击 “Bright Field” 切换到荧光GFP预览模式,调节曝光水平,哺乳动物细胞一般为18,可根据样品进行调节。


步骤四:设置阴性对照

插入阴性对照的样品,然后点击“Set-Control”,弹出下图对话框,点击OK,大约30sec时间,阴性对照分析结束,点击OK。

步骤五:检测GFP阳性细胞样品

插入 GFP-transfected 样品,点击 “Count Sample” ,大约30sec时间,样品检测结束,给出数据,如果想要继续检测样品,点击“Next Count”即可。

步骤六:结果查看、保存

点击“Image”,可查看明场、荧光场、是否Tag图片;
点击“Graph/Gating”查看细胞检测结果;
点击“Save/Print”进行结果保存,可保存PDF、图片、CSV多种格式的文件。


LUNA FL全自动细胞计数仪小结

▪ 具备明场和双荧光通道
▪ 激发光源:470±20nmLED,检测通道:525±20nm,600LP,适用于常见的细胞活性检测染料对,如AO/PI,FDA/PI等
▪ 更适合于PBMC、原代细胞、干细胞、酵母等组分复杂或者较小尺寸细胞的分析
▪ 可用于GFP转染效率的评估
▪ 自动液体透镜聚焦:操作简单、无磨损、响应快、聚焦稳定
▪ 大视野成像:数据更具统计学意义
▪ 去团化分析:计数更准确
▪ 机载计算机:无需外接电脑,节约空间
▪ 可重复使用玻片:节约使用成本
▪ 可输出:5MP图片、PDF、CSV数据

LUNA细胞计数仪荣获2019年金奖

在该严格的评级标准下,来自韩国Logos Biosystems公司的LUNA自动细胞计数仪获得SelectScience®质量奖章的金奖,在172位用户的评分中得到了平均4.7分的好成绩,受到了广大的科研工作者的一致好评,为您选择细胞计数仪提供有力的参考。

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