将RNAi表达构建物导入大脑后发现有毒

一项腺相关病毒（AAV）RNA干扰（RNAi）治疗脊髓小脑性共济失调1型的临床前安全性研究表明，由于意外的AAV倒置末端重复转录活性在改变RNAi表达环境后减轻，对非人灵长类动物而非啮齿类动物具有毒性。

　　

针对脊髓小脑共济失调1型的RNA干扰（RNAi）可以预防和逆转小鼠模型中的行为缺陷和神经病理学读数，其安全性和益处可持续数月。从腺相关病毒载体（AAV.miS1）表达的RNAi触发器也纠正了错误调节的miRNA（如miR150）。随后，我们证明了该给药方法是可扩展的，并且AAV.miS1在非人类灵长类动物（NHP）短期试点研究中是安全的。为了将这项技术推广到患者身上，在NHPs中开展了研究性新药（IND）使能研究。

但在将AAV.miS1运送至小脑深核后，我们意外地观察到小脑毒性。small-RNA-seq和使用缺乏miRNA的AAV进行的研究都表明，这不是内源性miRNA处理机制饱和的结果。RNA-seq和AAV产物测序表明，尽管交叉包装材料数量有限，但仍存在大量与神经病理学相关的倒末端重复序列（ITR）启动子活性。通过改变miS1表达环境，ITR启动子活性得到降低。啮齿动物和NHP研究结果之间令人惊讶的对比突出表明，在评估人类应用的新疗法时，需要在多个物种中进行广泛的安全性研究。

Toxicity after AAV delivery of RNAi expression constructs into nonhuman primate brain. Nature Medicine