不用染料也能准确定量DNA/RNA浓度的新方法

【字体: 时间:2021年08月19日 来源:

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  NanoDrop one的Acclaro污染物分析功能使用全光谱数据和先进算法来识别常见的核酸污染物,并提供校正的核酸浓度,以保证实验的效率。经过我们的不懈努力研发出新功能——如何检测和纠正DNA制备中的RNA污染或RNA制备中的DNA污染

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功能强大的我来啦!

自2015年出世以来,相信做分子实验的老师们对我并不陌生。我最出名的功能就是对核酸蛋白的检测,最强特异功能是Acclaro污染物分析功能,虽然我身体小小,但是应用广泛,功能强大,甚是惹分子生物学老师们的喜爱呢~

今天我带着新应用功能兴高采烈的赶来啦!


DNA、RNA轻松分辨

基因组DNA制备中的RNA污染是分子生物学工作流程中常见的问题。在用传统的光谱法测量样品时,共纯化的RNA会人为地增大DNA的浓度。尽管使用特定的DNA结合染料可能比260 nm的吸光度更准确地测定DNA浓度,但在基因组工作流程中,DNA(RNA)样品中的RNA(DNA)污染还是会对实验产生较大影响。

传统的核酸定量方法是分别测出230nm、260nm、280nm下的吸光度值,根据郎伯比尔定律换算出核酸的浓度,同时通过其比值,做纯度的指示。虽然这种方法最普遍,但它的缺点也很明显,根据它的原理不难发现任何污染物只要在这些波长下有吸收峰,都将导致不准确的核酸浓度结果,因此此方法缺乏特异性。

NanoDrop one的Acclaro污染物分析功能使用全光谱数据和先进算法来识别常见的核酸污染物,并提供校正的核酸浓度,以保证实验的效率。经过我们的不懈努力研发出新功能——如何检测和纠正DNA制备中的RNA污染或RNA制备中的DNA污染。

为了验证我们新功能的效果,我们对其进行了验证,使用来自于HeLa细胞的DNA和RNA,通过制备不同浓度比例的DNA/RNA混合液,每个样品做三次重复,吸取2μL在NanoDrop One上检测、使用荧光染料结合法以及传统260nm吸光度检测法进行浓度的测定。随后将260nm吸光度检测法测得浓度值、Acclaro分析功能校准后的浓度值、以及荧光标记法得到的DNA浓度值与理论目标浓度值进行对比,可以看到Acclaro分析功能得到的校准的浓度值与理论目标浓度值是最接近的。

(蓝色为260nm测吸光度法测得浓度值; 红色为DNA理论目标浓度值;绿色为Acclaro污染物分析功能校准后的DNA浓度值;紫色为荧光标记试剂盒法测得的DNA浓度值)

因此,通过使用全光谱数据和多元数学算法,研究人员可以克服传统的核酸定量方法以及荧光标记方法的分析缺点。运行Nanodrop One分光光度计的Acclaro软件可以识别DNA样本中的RNA污染或RNA样本中的DNA污染,并提供校正的浓度结果。这将可以帮助分子生物学家快速鉴别核酸提取中的污染物和改善下游结果。

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你对我这个新功能了解了吗?纸上得来终觉浅,绝知此事要躬行。心动了就快快行动起来吧,欢迎联系我们进行试用哦!

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