ImageStreamX 显微成像流式细胞仪

ImageStream^X
显微成像流式细胞仪
——革命性的细胞分析平台

突破性的流式应用

图像化的直观分析界面

DEAS软件界面
IDEAS分析软件具备强大的图像分析能力，配合ImageStream^X独特的高速成像技术，使得流式分析有了革命性的创新，达到了一个前所未有的水平。

快速和有效的数据分析
IDEAS图像分析软件集成了大量强大的分析工具，预置的应用向导使得新手也能轻松和快速得实现图像和流式分析。直观的数据界面和有效地分析参数令您轻松的进行更加深入的分析。用户也能为所有的应用定义专门的分析模板，便于以后的分析。

丰富的特征参数
IDEAS软件预置了大量的图像特征参数，能对细胞的形态学变化和荧光亚细胞定位做统计学分析。用户也可无限制定义特征参数。

ImageStream^X为每一个细胞提供最多12张图像，并且在图像的基础上计算出了上千个特征参数。因此ImageStream^X不仅能检测荧光强度，而且能分辨荧光信号的亚细胞定位。这大大拓展了流式分析的应用领域，如蛋白质核转位、蛋白质共定位和细胞内吞研究等领域，相比于显微镜观察分析的方法，ImageStream^X对荧光信号亚细胞定位实行严格的参数化界定，使得所有分析有了一个客观统一的标准，并且能在短时间内轻松实现上万个细胞的统计学分析。

全血白细胞中单核细胞和T细胞的NF-κB转位研究

• ImageStreamX高速采集每个细胞的图像。

• 利用单核细胞和T细胞特异性表面标记CD14(PE)和CD3(APCAF750)，将这两种细胞鉴定出来。

• 对每个细胞进行NFκB(FITC)核转位程度分析。利用IDEAS分析软件预置的Similarity参数（即两色荧光像素空间分布的一致性，相似性越高，转位程度越高），通过分析NFκB和细胞核(DAPI)的Similarity值，可以准确地统计出NFκB核转位阳性细胞亚群所占比例。

外周血细胞中的DC细胞内吞CpGB及其细胞内定向运输研究

传统流式细胞仪只有前向角和侧向角散射光两个参数对细胞形态进行简单的分析，因此全面的细胞形态学分析必须借助于显微镜观察，而显微镜观察的细胞数量毕竟有限且人与人之间以及同一人对各个细胞的判断标准不一，往往很难得到准确、客观的数据。 ImageStream^X则能快速、方便、准确地对大量细胞的形态学变化进行统一标准的分析并且给出统计数据，而且还能突破传统方法的局限性，对混合细胞群中的稀有细胞亚群进行形态学分析。
MCP-1诱导的原代单核细胞形态变化研究用ImageStream^X研究MCP-1诱导的原代单核细胞细胞形态变化，应用预设的Circularity参数，Circularity越小表示细胞形态变化越明显。

T细胞和APC细胞相互作用及其免疫突触分析 D011.10 TCR转基因小鼠淋巴结中分离的OVA多肽特异性T细胞与OVA多肽致敏APC细胞相互作用及其免疫突触分析含下列步骤: 1、利用T细胞表面标记(PE-Cy5.5 aThy1.1)对T细胞和含有T细胞的双联体细胞设门 2、根据DNA的含量和7-AAD的Aspect Ratio值对含T细胞的双联体细胞设门 3、利用ADAP(PE)和7-AAD之间的Delta Centroid值和ADAP的Aspect Ratio值找出T细胞和APC细胞的双联体 4、通过软件分析两个细胞结合部位的ADAP信号占整个细胞ADAP信号的比例，以及ADAP的Aspect Ratio值找出已经形成免疫突触的T细胞与APC双联体，其比例约占整个细胞群体的17.6％

伪足形成分析研究人员对一个IL-3依赖性细胞系在IL-3饥饿3小时后重新供给IL-3，观察细胞伪足形成的情况。细胞被PE标记的抗伪足标志分子Podo的抗体和DRAQ5染色，然后用ImageStream^X 进行检测。利用Aspect Ratio和Delta Centroid参数绘制散点图，将伪足形成过程中的细胞分成Uniform、Capped及Pseudopod等三类。 Radial Delta Centroid（RDC）：即两色荧光图像的中心间距离，如右图所示，形态均一、成帽以及伪足形成细胞的RDC值依次增大。 Aspect Ratio（AR）：即细胞横/纵轴比。形态均一、成帽以及伪足细胞的AR值依次减小。

红细胞分化（去核化）红细胞去核化过程伴随着Glycophorin A(PE)的高效表达和CD71(FITC)的缺失，用ImageStream^X研究红细胞去核化过程，不仅能用上述细胞特征来对正在经历去核化过程的细胞设门，而且能进一步利用细胞的形态和荧光信号的亚细胞定位将其细分为几个不同的去核时期。

ImageStream^X除了能跟传统流式一样用AnnexinV、TUNEL或者 Caspase等主要细胞凋亡标志检测凋亡外，还能结合细胞核表型的变化，如核酸片段化来研究细胞凋亡。基于形态的分析，ImageStream^X相比于传统流式细胞仪具有两方面的优势：（1）能准确区分晚期调亡和坏死；（2）能够区分假阳性和假阴性。大多数利用流式细胞术检测调亡的方法，如Annexin V/PI法，很难区分晚期调亡和坏死细胞，因为两者都表现为Annexin V和PI双阳性。但这两种细胞在细胞核形态上存在明显区别：晚期调亡细胞由于染色体的断裂和浓缩，细胞核不完整，而是塌缩为几个小的区域，相反坏死细胞的细胞核很完整。根据这个特征，ImageStream^X可以通过对细胞核形态进行分析，清晰的区分细胞调亡的不同阶段，区分晚期调亡和坏死细胞。细胞调亡检测过程中，无论是TUNEL法、Annexin V法还是Caspase 法都常常会遇到假阳性和假阴性的情况。假阳性一般是由于正常细胞上黏附了调亡小体，从而在流式检测时误认为是阳性。如图A右下、B右下和C右下所示的情况，一些正常细胞表面附着了调亡阳性碎片而显示调亡阳性，但ImageStream^X可以利用IDEAS软件中的Delta Centroid参数来区分真假阳性。相反，一些已经出现了染色体断裂和浓缩的调亡细胞检测时却是Annexin V或Caspase阴性的，从而造成假阴性结果（图B右上，图C左下）。由于ImageStream^X能够获得细胞图像，并对图像进行分析，因此可以排除这些假阳性和假阴性结果。

悬浮FISH ImageStream^X的EDF（Extended Depth of Field）模块能大大增大成像景深，使得悬浮FISH成为现实，并且ImageStream^X独特的流式分析能对混合细胞中稀有细胞群体进行FISH研究。

细胞周期分析传统方法对细胞周期的分析采用流式细胞仪和显微镜结合的方法。流式细胞仪根据细胞中核酸的含量不同将细胞分为G0/G1期、S期和G2/M期，显微镜则可以用来进一步观察和寻找处于有丝分裂不同时期的细胞。而ImageStreamX不仅能跟传统流式一样将细胞分为G0/G1期、S期和G2/M期，而且相比于传统方法还有以下优势：（1）根据细胞核形态的变化和核酸在细胞内的亚细胞定位不同进一步将细胞周期细分为前期、中期、后期和末期。（2）消除了使用显微镜在大量的细胞群体中去寻找稀有的处于有丝分裂期细胞的困难，而且能准确得到各个时期细胞占总细胞数的统计数据。（3）Sub-G0峰的出现被认为是部分细胞发生了凋亡，但是研究发现这样的峰往往是假凋亡现象，而ImageStreamX提供的图像支持能帮助您判断真假。

各个时期细胞占总细胞数比例统计

DNA损伤和修复 γ-H2AX能够识别和修复DNA双链的断裂，将原代细胞暴露在离子辐射下，用γ-H2AX去修复断裂的DNA，然后利用ImageStream^X收集数据，利用软件的Spot Counting 功能对γ-H2AX（FITC）的荧光点进行计数分析DNA损伤和修复。

由基因公司委托生物通制作