Exosome外泌体纯化试剂盒 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

新型亲和分子纯化外泌体
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS

◆ 原理
　　外泌体和其他细胞外囊泡（EVs）属于小细胞膜囊泡，包含蛋白，mRNA，microRNA，DNA和脂类，是由不同细胞分泌，并且在体液包括血液、唾液、尿液、脑脊髓液（CSF）和乳液中稳定存在。这些EVs被当做细胞和细胞沟通的信使，不同疾病的生物标志物。提取外泌体的常规方法有：超滤，使用表面抗原的抗体进行亲和层析，和用多聚物试剂进行沉淀。然而，这些方法在回收效率，纯度和可操作性上不是非常令人满意。

　　MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS采用磁珠和磷脂酰丝氨酸（PS）结合蛋白（PS亲和法）的方法进行纯化。该方法可以很方便获得高纯度的外泌体和其他来自细胞培养基和体液的EVs（通过正常的微滤方法获得高产量）。如果想要获得更高纯度的外泌体，请使用10,000×g获得上清。该试剂盒利用中性pH的金属螯合试剂，将捕获的EVs从磁珠上洗脱下来，可以获得完整的外泌体和其他EVs。纯化的完整外泌体和其他EVs可用于不同实验，包括电镜分析，纳米粒子追踪分析，EVs的操作和分析。

1. 细胞膜表面磷脂酰丝氨酸的亲和方法

使用磷脂酰丝氨酸（PS）结合蛋白，细胞外囊泡在金属离子依赖方式捕获，接着用金属粒子螯合试剂进行洗脱

◆ 优点•特色
images/nezumi-1[1]-cn.jpg

使用新型亲和纯化方法

● 通过PS亲和分子回收
● 低背景值
● 在中性条件下通过螯合试剂进行温和洗脱
※可获得高纯度，完整的外泌体

无需进行超滤
●使用磁珠改进了操作
●流程优化
※高重复性

与其他纯化方法相比
方法	纯度	外泌体回收率	获得囊泡的完整性
MagCapture™（PtdSer亲和方法）	◎	■■■	○
超滤	△	■■	○
多聚物沉淀	×	■■■■	○
外泌体表面抗原亲和方法（使用抗体）	○	■	×

样品类型：细胞培养上清，血清，尿液等。
注意：该试剂盒不适合用螯合剂比如EDTA，柠檬酸处理的血浆样品

产品列表

产品名称	包装规格	和光编号	保存条件
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS	10次	293-77601	保存在2-10°C
试剂盒成分 (1) 链霉亲和素磁珠 (2)生物素标记的外泌体捕获 (3)外泌体捕获免疫固定缓冲液 (4) 外泌体结合增强剂(x 500) (5) 洗涤缓冲液 (6) 外泌体洗脱缓冲液 (7) 反应管	<10 次> 600 μL x 1 管 100 μL x 1 管 35 mL x 1 瓶 500 μL x 1 管 75 mL x 2 瓶 5 mL x 1 瓶 22 管		保存在2-10°C

◆ 案例•应用

1. 从人血清中提取外泌体的产量比较
　　使用该试剂盒，超滤和表面抗原的抗体亲和纯化的方法提取人血清样品的外泌体，接着中CD9和CD63抗体进行免疫印迹实验进行检测。

第1道：超滤
第2道：MagCapture™
第3道：外泌体提纯试剂盒（CD9）（公司A）
第4道：外泌体提纯试剂盒（CD63）（公司A）
第5道：外泌体提纯试剂盒（CD81）（公司A）
第6道：外泌体提纯试剂盒（CD9）（CD9，CD63，CD81&EpCAM的抗体磁珠混合物）

nezumi-2[1]-cn.jpg

2. 常规沉淀方法的比较
　　来自K562（人慢性粒细胞白血病（CML））细胞培养上清（无血清培养基，或者10% 外泌体缺失FBS补充培养基）用该试剂盒、超滤和多聚物沉淀方法纯化外泌体的产量和纯度比较。
MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS
　　离心（10,000 ×g ，30分钟），从1mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）收集外泌体（根据试剂盒操作流程，反应时间：3小时）

超滤
　　离心（10,000 ×g ，30分钟），10mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）超滤（110,000×g，70分钟）。用TBS重悬沉淀后，重新超滤沉淀的片段回收。

多聚物沉淀
　　离心（10,000 ×g ，30分钟），从1mL预处理的K562细胞培养上清（无血清培养基或者10%外泌体缺失FBS补充培养基）收集外泌体(根据公司A的实验流程，预计时间：过夜)

2-1 用NanoSight进行电镜显微镜分析和Nano示踪分析
　　使用MagCapture™、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清（无血清培养基）获得的外泌体片段的颗粒大小用NanoSight LM-10进行鉴定。收集的外泌体片段(2-4 x 1010颗粒)用2%多聚甲醛进行固定，用电镜分析。

nezumi-3[1]-cn.jpg

2-2. K562细胞培养上清回收量和纯度的比较（无血清培养基）
　　用MagCapture™、超滤和多聚物沉淀从K562 细胞培养上清（无血清培养基）获得样品进行电泳。接着用银染，CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗体进行免疫印迹实验。

k562-1[1]-cn.jpg
nezumi-4[1]-cn.jpg

2-3. 从K562细胞培养上清获得回收率和纯度的比较（用10% FBS-补充）
　　用MagCapture™、超滤和多聚物沉淀三种方法，从K562 细胞培养上清（10% 外泌体-缺失 FBS补充培养基）获得样品进行电泳，用银染方法和CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗体进行免疫印迹。同时，收集的样品也进行质谱测定，比较所有鉴定的多肽中来自K562细胞的人来源多肽的百分比（由于添加到细胞培养基的FBS中牛蛋白聚集体是混杂的，所以人来源多肽的比率会下降）

3. 细胞培养上清或者血清的预处理

protocol[1]-cn.jpg

4. 检测流程

货号	名称	规格	零售价	活动价
293-77601	MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS 外泌体纯化试剂盒（PS亲和法）	10 tests	~~8980~~	6735

信息反馈>>

北京：+86 10 8580 4838

1433642494
广州：+86 20 8732 6381

1043735153
上海：+86 21 6288 4751

562608361

欢迎关注我们的微博：宝柏-中国
www.boppard.cn 　　info@boppard.cn

本网页由宝柏•中国委托生物通设计制作