Novagen所有感受态细胞7.5折促销活动！（2006.4.1-6.30）  
  • 密码子偏倚性造成的表达水平很低……
  • 表达蛋白无活性或活性很低……
  • 包涵体问题……
        在原核蛋白表达过程中，您遇到过这些问题吗？在构建一个原核表达体系过程中，研究者会综合考虑到载体、宿主菌株、表达诱导条件三方面因素,以获得最满意的表达效果。Novagen的pET系统是有史以来在大肠杆菌中表达重组蛋白的功能最强大的系统，也是现今原核表达方面使用最广泛的系统。历年来专注于蛋白表达的Novagen不断推出适应不同需求的各种原核表达用大肠杆菌菌株，帮助您达成自己的目标：

Bl21系列- lon和ompT蛋白酶缺陷型，日常蛋白表达的常用选择，理想的起始表达菌株。

Rosetta 2系列- BL21衍生菌，补充大肠杆菌缺乏的七种（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA 及CGG）稀有密码子对应的 tRNA，提高外源基因、尤其是真核来源基因在原核系统中的表达水平。

Origami 2系列- K–12衍生菌，thioredoxin reductase (trxB) 和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变菌株，改善胞质中二硫键形成几率，促进蛋白可溶性及活性表达。

更多选择，请参考宿主菌株选择指南，或pET系统操作手册-原核表达宝典。


 蛋白表达常见问题及改进建议

现象

可能原因

改进方案

建议菌株

无蛋白表达

E. coli 的密码子偏移性

补充稀有密码子的tRNA；将稀有密码子突变为普通大肠杆菌密码子

Rosetta 2
Rosetta-gami 2
Rosetta-gami B
RosettaBlue

出现截短蛋白

包涵体

二硫键形成困难

降低宿主胞质的还原性；利用促进二硫键形成的各种载体标签

Origami 2
Rosetta-gami 2
Rosetta-gami B

表达过快，表达量过高

控制优化表达水平：降温，IPTG浓度优化

Tuner
Rosetta-gami B

蛋白无活性

蛋白错误折叠

降低宿主胞质的还原性；利用促进二硫键形成的各种载体标签

Origami 2
Rosetta-gami 2
Rosetta-gami B

控制优化表达水平：降温，IPTG浓度优化

Tuner
Rosetta-gami B

细胞死亡，生长极困难

毒性蛋白

更严格的本底表达控制

pLysS 菌株

无克隆生长

过高本底表达

更严格的本底表达控制

pLysS、pLysE 菌株

 重组质粒和菌株的保存建议

        在实验室里保存重组菌株的时候，为了挑菌和传代方便，我们常用LB平板保存在4℃冰箱中，需要提质粒和表达接种的时候，就直接从平板上挑菌，但是这种方法对于重组质粒的稳定性不利，容易出现质粒丢失、表达水平不稳定、菌株退化乃至发生污染等情况。 我们建议：
        1、 长期存放菌株和pET重组子应该存在甘油里，－70℃存放。但是要注意高浓度甘油(> 10%)会导致质粒不稳定。请尽量保持甘油浓度8％。
        2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株（带DE3的大肠杆菌）中，请尽量使用不能表达T7 RNA聚合酶的大肠杆菌菌株（非DE3的大肠杆菌），大提质粒也请选用非表达型菌株进行。		  
Novagen-the Gold Standard in Protein Expression
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