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克隆用PCR酶选购攻略

千里之行,始于足下;基因克隆,始于PCR。

为了获得令人满意的克隆结果,您可以采用限制性内切酶处理、TA克隆及In-Fusion无缝克隆等多种方法。但是无论哪种选择,通过PCR获得目的DNA片段,都是非常重要的操作环节。

这其中,PCR酶作为PCR反应液中的重要组成部分,在合成新的DNA链中起着关键的作用。因此,选择合适的PCR酶,是克隆实验成功的关键一步。

今天,就让小编带大家来详细了解一下,克隆用PCR酶应该怎么选?

攻略一:克隆的重中之重是保真性!
产品推荐: PrimeSTAR®系列高保真酶,克隆用PCR酶的理想选择!
PrimeSTAR®系列具有很强的3'→5'外切酶活性,保真性优于Takara Bio的其他任一种PCR酶。此外,该酶兼具很高的反应性能,可谓是克隆用PCR酶的理想选择。

PrimeSTAR®系列包括保真性高、且能快速进行PCR反应的【PrimeSTAR® Max】、长链及GC rich样品也能良好扩增的【PrimeSTAR® GXL】、无偏差基础款高保真酶【PrimeSTAR® HS】等,请根据实验目的进行选择。

■ 错误率低!PrimeSTAR®系列与其他各种PCR酶的保真性能比较


■ PrimeSTAR®系列的特点

攻略二:唯快不破!如何加速获得基因克隆实验结果!
产品推荐: PrimeSTAR® Max DNA Polymerase(Code No.R045) + In-Fusion®克隆实验黄金组合
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase是兼具快速延伸性和高保真性的DNA聚合酶。利用酶自身的高priming效率和特别添加的延伸因子,可大幅缩短退火时间和延伸时间,实现了高速PCR反应。

■ 快速PCR反应的扩增效率

■ 多个DNA片段同时进行克隆


攻略三:PCR有麻烦,多个扩增困难因素同时存在,怎么办?
产品推荐:高成功率PCR 酶-Tks Gflex™ DNA Polymerase(Code No.R060)

使用改良α型聚合酶、通过添加改良型延伸因子提高反应性能
通过对α型聚合酶进行改良、抑制了酶自身对于DNA模板的非特异性扩增以及过剩结合。 此外,通过添加改良型延伸因子,使得DNA合成能够连续顺畅的进行,从而提高反应性能。增加延伸性、能够稳定的获得足够长度的扩增产物。(图1)

■ 通过背景降低因子的添加大幅提高了反应的特异性
通过【背景降低因子】提高引物特异性结合,从而大幅减少非特异性扩增(图2)。

■ 多个扩增困难因素存在条件下的PCR

 [制品一览表]
制品名称 包装量 Code No.
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase 250 U R010A
1,000 U R010B (A × 4)
50 U R010Q
PrimeSTAR® HS (Premix) 50 μl反应 × 100 次 R040A
50 μl反应 × 40 次 R040Q
PrimeSTAR® HS DNA Polymerase with GC Buffer 250 U R044A
1,000 U R044B (A × 4)
125 U R044Q
PrimeSTAR® Max DNA Polymerase 50 μl反应 × 100 次 R045A
50 μl反应 × 400 次 R045B (A × 4)
50 μl反应 × 25 次 R045Q
PrimeSTAR® GXL DNA Polymerase 50 μl反应 × 200 次 R050A
50 μl反应 × 800 次 R050B (A × 4)
50 μl反应 × 40 次 R050Q
PrimeSTAR® GXL Premix 50 μl反应 × 200 次 R051A
50 μl反应 × 800 次 R051B (A × 4)
50 μl反应 × 40 次 R051S
Tks Gflex™ DNA Polymerase 250 U R060A
1,000 U R060B (A × 4)
50 U R060Q
In-Fusion HD Cloning Kit 10 Rxns 639648
50 Rxns 639649
100 Rxns 639650



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