要使某个表型在细胞内稳定表达,可以通过点突变实现,即将外源突变位点通过同源末端重组的方式与基因组中特定位点进行替换。但在实际研发过程中,结果总是不尽人意。在构建细胞株时,你是否难以得到点突变纯合子?培养出来的细胞状态差?相比于基因敲除细胞株,点突变细胞株在设计实验方案时,需要考虑基因片段长短、同源重组效率等多种因素,不同细胞株编辑效率差异很大,构建难度偏高。
经大量测试和实验工艺优化,赛业生物开发了Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统,实现更深度的基因信息分析和更合理的gRNA设计。基于该系统,我们能提供准确快速的点突变细胞株构建服务,通过赛业生物优化的α-donor体系将人源化的Cas9蛋白、gRNA和donor三组分转染至目的细胞,产生高效同源重组,实现纯合子交付。现在下单,HEK293T、A549、HCT 116、HEK293等多种细胞的点突变项目均可享受3.98万的优惠价格。
除了体外细胞模型,赛业生物还开发了一系列点突变大小鼠模型,基于成熟的基因编辑平台,可提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型构建及表型分析的全流程服务。欢迎拨打400-680-8038 或邮件至info@cyagen.com联系我们。
细胞简称 | 中文名称 | 订购 |
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HEK293T | 人胚肾细胞 | |
A549 | 人非小细胞肺癌细胞 | |
HCT 116 | 人结肠癌细胞 | |
HEK293 | 人胚肾细胞 | |
Hela | 人宫颈癌细胞 | |
BEAS-2B | 人正常肺上皮细胞 | |
HK-2 | 人肾近曲小管细胞 |
行业技术难点 | 赛业生物解决方案 | |
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gRNA和donor设计不合理,同源重组效率低 | ▶ |
智能的Smart-CRISPRTM细胞基因编辑系统:可科学设计高效率、低脱靶的gRNA,编辑效率高达90%;
自研的α-donor系统:HDR效率高达50%,远高于市面上的编辑效率,可实现无痕修复(footprint-free)。
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细胞转染方式不当导致效率低 | ▶ | 多类型细胞(肿瘤、非肿瘤、干细胞和IPS细胞等)均能在转染前调整至对数生长期状态 多种转染技术支持,包括磷酸钙共沉淀、人工脂质体法、电穿孔法、病毒感染等 |
递送载体选择不当,转染后细胞大量死亡 | ▶ | 所用的RNP递送方式使得细胞活率高达90%,悬浮细胞基因编辑效率显著提升 |
单克隆生长时间长、制备难以成功 | ▶ | 掌握多种独特的制备方法,单克隆形成率可达30%以上,通过筛选一轮即可获得足够的阳性克隆 |
单克隆数据杂乱 | ▶ | 快至1min分析和鉴定点突变效率及纯合子克隆 |
iPS细胞在编辑过程中容易分化,失去干性 | ▶ | 16年干细胞项目经验,可培养出理想的iPS集落:内部紧实、大小均匀且边缘清晰 |
体外细胞模型存在局限性,与临床结果偏差较大 | ▶ | 拥有点突变大小鼠模型,能更好地模拟复杂生物学环境,便于研究疾病机制与药物疗效 |
细胞类型 | Cell pool HDR效率 | 测序峰图 | 单克隆纯合子阳性率 |
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HEK293人胚肾细胞 | 13% |
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高达35% |
NCI-H1299人非小细胞肺癌 | 37% |
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IPSC诱导多能干细胞 | 46% |
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肌萎缩侧索硬化(ALS)是一种致命的神经退行性疾病,其特点是运动皮层、脑干和脊髓中的运动神经元(MNs)逐渐退化和消失。一些家族性ALS是由超氧化物歧化酶1(SOD1)基因突变引起的。研究人员使用CRISPR/Cas9基因组编辑系统和人类诱导多能干细胞(iPSCs),制备了高度纯化的iPSC分化的MNs SOD1-G93A点突变模型。通过与野生型细胞系和患者iPSC(含SOD1-A4V突变)分化的MNs作比较,确定了与ALS相关的病理表型。
酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)如吉非替尼(gefitinib)和厄洛替尼(erlotinib)对肺腺癌表皮生长因子受体(EGFR)突变有效。但癌细胞会在长时间接触这些药物后产生耐药性,超过50%的病例是由EGFR T790M突变引起。使用新药还会产生额外的耐药突变。研究人员通过CRISPR/Cas9技术构建了PC9 T790M突变增强型细胞株,在PC9原有基础上提高了T790M突变比例,并且在等量吉非替尼暴露下,PC9 T790M突变细胞株耐药性更强,但对奥西替尼敏感性更强。因此利用CRISPR/Cas9构建的点突变细胞株效率更高,更适用于三代EGFR小分子抑制剂筛选。