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Hep G2 PCCA, PCCB 5095, 5096 Human SY-KO-00216 1*10^6
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HEK293T TFEB 7942 Human SY-KO-00241 1*10^6
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MC38 Cd274 60533 Mouse SY-KO-00262 1*10^6
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Huh-7 ACE2 59272 Human SY-KO-00288 1*10^6
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THP-1 DTX3L 151636 Human SY-KO-00290 1*10^6
Jurkat BTN3A3 10384 Human SY-KO-00291 1*10^6
HK-2 TPH1 7166 Human SY-KO-00292 1*10^6
HT-29 SLC22A15 55356 Human SY-KO-00293 1*10^6
MH-S Vsig4 278180 Mouse SY-KO-00294 1*10^6
Huh-7 ACSL5 51703 Human SY-KO-00295 1*10^6
CAL-27 HAX1 10456 Human SY-KO-00296 1*10^6
SCC-4 HAX1 10456 Human SY-KO-00297 1*10^6
DLD-1 BRCA1 672 Human SY-KO-00298 1*10^6
DLD-1 BRCA2 675 Human SY-KO-00299 1*10^6
H292 METTL3 56339 Human SY-KO-00300 1*10^6
MIA PaCa-2 LINC00476 100128782 Human SY-KO-00301 1*10^6
PC-9 RB1 5925 Human SY-KO-00302 1*10^6
PC-9 TP53 7157 Human SY-KO-00303 1*10^6
PC-9 RB1, TP53 5925, 7157 Human SY-KO-00304 1*10^6
HCT 116 DHX9 1660 Human SY-KO-00305 1*10^6
HaCaT F2RL1 2150 Human SY-KO-00306 1*10^6
HaCaT KLK5 25818 Human SY-KO-00307 1*10^6
IPS MIR137 406928 Human SY-KO-00308 1*10^6
PC-3 CRBN 51185 Human SY-KO-00309 1*10^6
RAW 264.7 Bsg 12215 Mouse SY-KO-00310 1*10^6
Hep G2 TFF3 7033 Human SY-KO-00311 1*10^6
RAW 264.7 Tlr4 21898 Mouse SY-KO-00312 1*10^6
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LoVo CXCL12 6387 Human SY-KO-00314 1*10^6
PC-9 CEBPZOS 100505876 Human SY-KO-00315 1*10^6
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NIH/3T3 Smo 319757 Mouse SY-KO-00318 1*10^6
Jurkat HDAC1 3065 Human SY-KO-00319 1*10^6
AGS BCKDK 10295 Human SY-KO-00320 1*10^6
PANC-1 KCNN4 3783 Human SY-KO-00321 1*10^6
PANC-1 TRPV6 55503 Human SY-KO-00322 1*10^6
Hep G2 MIR143 406935 Human SY-KO-00323 1*10^6
HK-2 CYP1A1 1543 Human SY-KO-00324 1*10^6
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SK-OV-3 B2M 567 Human SY-KO-00326 1*10^6
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B16-F10 Cgas 214763 Mouse SY-KO-00328 1*10^6
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B16-F10 Sting1 72512 Mouse SY-KO-00330 1*10^6
IPEC-J2 NLRP6 100519245 Pig SY-KO-00331 1*10^6
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IOSE-80 RAD51C 5889 Human SY-KO-00343 1*10^6
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IPS KCNT1 57582 Human SY-KO-00347 1*10^6
IPS MBD5 55777 Human SY-KO-00348 1*10^6
IPS STXBP1 6812 Human SY-KO-00349 1*10^6
SW1353 STING1 340061 Human SY-KO-00350 1*10^6
Huh-7 AFP 174 Human SY-KO-00351 1*10^6
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服务案例——THP-1基因编辑

Di-(2-ethylhexyl) phthalate exposure leads to ferroptosis via the HIF-1α/HO-1 signaling pathway in mouse testes. 点击查看文献解读详情>>

研究思路：
1.体内外验证DEHP刺激可导致睾丸损伤。
2.组学分析与实验验证得出HIF-1α等信号通路出现异常。
3.探索HIF-1α信号通路的作用机制。
4.体外敲除HIF-1α进一步验证HIF-1α的作用。

严谨的研究，需要完整的实验流程，一般采用组学分析科学地筛选基因、得到多种实验结果需要相互印证。基因敲除依旧是基因功能研究的常规策略之一，一个成功的基因敲除细胞株，对验证结果的准确性至关重要。

在这项研究中，作者通过MEHP刺激后的表型分析、RNA-Seq分析、ChIP-qPCR 分析等发现与睾丸细胞功能障碍相关的调控基因：HIF-1α。并初步发现其调控机制：MEHP（体内DEHP的主要生物代谢物）可抑制PHDs，影响HIF-1α积累和稳定，导致HIF-1α易位到细胞核，并诱导Leydig和Sertoli细胞中HIF-1/Hmox1结合，使HO-1的表达上调。HO-1的过表达导致亚铁超载，ROS积累，最终导致铁死亡，损伤Leydig和 Sertoli细胞的活性。

为了进一步确认这一结果，研究人员构建了 HIF-1α基因敲除的Leydig和Sertoli细胞系（HIF-1α基因敲除的Leydig和Sertoli细胞系，由赛业生物提供），用于后续的实验。通过Sanger测序和Western blotting检测，确认了敲除细胞系中的HIF-1α被成功敲除。在与野生型细胞相比，HIF-1α-KO的细胞系在MEHP刺激下细胞活力受损的程度有明显改善。同时，脂质过氧化（图1B，I）和亚铁超载（图1C，J）也受到抑制。分别使用qPCR和Western印迹法评估Hmox1和HO-1水平的表达，发现敲除Hif-1α能逆转MEHP刺激下的Hmox1（图1D，K）和HO-1（图1G，N）表达水平上调。

此外，MEHP刺激后ROS爆发（图1E，L）和细胞死亡（图1F，M）程度也在敲除HIF-1α后减弱。

Western印迹显示敲除HIF-1α恢复了ACSL4、FTH1和SLC7A11的表达，以及抑制GPX4的表达（图1 G，N）。总的来说，这些结果表明，MEHP刺激以HIF-1α依赖的方式导致睾丸Leydig和Sertoli细胞的铁死亡。

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