提取土壤RNA是环境或农业分子生物学研究中相当关键却又困难重重的一步，不仅因为RNA提取本身就相对困难，也是因为土壤中RNA的含量也相对更低。与DNA相比，土壤中RNA的含量通常仅有DNA的10-20%，因此为了满足下游检测的需求，就需要更多的土壤样本量。此外，更重要的是，土壤中含有较多代谢产生的腐殖酸或黄腐酸类抑制剂，且不同类型的土壤样本中抑制剂含量也存在差异，如果抑制剂去除不理想，则会进一步对下游PCR反应或NGS文库构建的效果产生影响。
在过去的几年中，QIAGEN不断对微生物核酸研究方案进行技术革新，在全新的“珠磨研磨方案”和“抑制剂去除技术（Inhibitor Removal Technology, IRT)”的支撑下，近期重磅推出了用于土壤样本的RNA大量提取试剂盒—RNeasy PowerMax Soil Pro Kit。这款试剂盒采用了升级版的PowerMax Bead Pro研磨管，可实现5-15g大量土壤样本的等效裂解，有助于得到更高产量的RNA；同时，新一代IRT技术可将抑制剂残留影响降至极低，并具有更为简单便捷的流程。RNeasy PowerMax Soil Pro Kit采用了QIAGEN经典的硅胶膜柱法进行纯化，可在2小时内快速完成8例最高15g土壤样本的RNA提取，相比经典款试剂盒可提速60% ，极大提高了实验的效率。
试剂盒配备的PowerMax Bead Pro研磨管中预装了优化材质和粒径的混合研磨珠，可高效裂解多达15g土壤样本中的细菌、真菌和古菌等微生物，彻底释放RNA，相比同类产品可实现更高的RNA得率。值得关注的是，PowerMax Bead Pro研磨管可搭配新一代TissueLyser III样本破碎仪达到更为高效的裂解和均质化效果。
在RNeasy PowerMax Soil Pro Kit的操作流程中，裂解时、裂解后将会两次使用新款IRT缓冲液Solution CD2，进一步保障了针对大量土壤样本的抑制剂去除效果。我们通过RT-qPCR实验对此前提取得到的相同体积RNA洗脱液中的抑制剂残留进行了检测，实验结果表明，即使同等体积下RNeasy PowerMax Soil Pro Kit洗脱液中含有显著更高的RNA浓度，得到的ΔCT依然在可接受的范围之内，表明RNeasy PowerMax Soil Pro Kit所采用的新一代IRT技术能够更加稳定地对抑制剂进行去除。此外，升级后的IRT过程不再需要低温处理，操作更加简单。
RNA完整性是下游检测结果的首要关键影响因素，毛细管电泳结果显示，RNeasy PowerMax Soil Pro Kit提取的RNA片段完整性更好，高质量RNA可直接用于下游PCR、qPCR和NGS应用，从而能够更加真实反应样本的微生物信息。
图3.RNA完整性对比
此外，RNA完整性也得益于样本的及时保存，由于RNA降解速度远快于DNA，因此在进行RNA提取前收集完土壤样本后建议立即并快速的将样本放入RNA稳定保护剂中保存，尤其是在野外采集样本时。我们推荐使用专门的PowerProtect DNA/RNA保存液对土壤进行保存，微生物RNA可在室温(4°C-25°C)稳定保存至少2个月，在-30至-15°C或-90至-65°C条件下可长期冷冻保存；即使在35℃的高温条件下，也可使DNA维持稳定14天，RNA维持3天。PowerProtect DNA/RNA保存液除了可以对土壤中的RNA与DNA进行保护外，还能在运输和保存过程中保持微生物群落和功能特征的完整。此外，保存的土壤样本下游可无缝衔接Power系列试剂盒进行核酸提取。
RNeasy PowerMax Soil Pro Kit特点一览
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升级款PowerMax Bead Pro研磨管可高效裂解多达15g土壤样本中的细菌、真菌和古菌等微生物，RNA产量更高
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新一代IRT技术帮助获得更高纯度RNA，一步法室温去除抑制剂
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RNA片段完整性高，可更精确反映样本中的微生物信息
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操作时间缩短到2小时，提速60%，极大提高实验效率
除RNA提取产品外，QIAGEN还有PowerSoil Pro系列DNA提取试剂盒，并可为广大研究者提供从核酸提取到下游PCR、NGS检测和数据分析的Sample to Insight完整解决方案。想要了解更多产品信息或更多微生物组研究资讯，请扫描下方二维码获取，感谢您的支持！
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