优惠来咯~好用的基因编辑后SNP高通量筛选，要来试试吗？

CRISPR/Cas9是基因组编辑领域重要的突破。在Cas9 DNA切割酶与sgRNA(single guide RNA)的共同作用下，定点基因组改造的难度显著降低，可进行操作的目标生物种类大大增加。

基因编辑技术其中一个强大的应用，就是在特定的基因组位点导入核苷酸替换，去模拟与人类疾病相关的单核苷酸多态性(SNPs)或者插入终止密码子以实现准确的基因敲除。然而，在没有相应的表型的情况下，要从数以百计的克隆中筛选出一个对单核苷酸进行了编辑的细胞克隆并不轻松。但是现在，Guide-it™ SNP Screening Kit可以轻松解决这个问题！

Guide-it™ SNP Screening Kit可以检测CRISPR/Cas9系统编辑后细胞群中的单核苷酸替换，在96孔板中快速识别出基因编辑后的细胞克隆。整个操作流程简单快速，约4小时即可完成。首先通过PCR扩增基因组靶标位点，之后使用识别特定结构的核酸内切酶进行酶切反应，然后读取荧光值就可以完成单核苷酸替换检测。无论需要检测的核苷酸替换类型、细胞克隆的接合性或者靶标位点的基因序列如何，都可以使用这个方法进行检测。

话不多说，一图交代清楚实验原理！

上图操作流程为G>A替换（野生型鸟嘌呤编辑为腺嘌呤）的检测过程。基因编辑后，通过FACS或者有限稀释法分离单细胞并扩大培养成为克隆细胞系，包含野生型（G）细胞系和核苷酸编辑成功的细胞系（A）。

之后提取基因组DNA，PCR扩增靶标位点附近的序列区域，所产生的PCR产物（蓝色）会与两个不同的互补寡核苷酸——一个displacement oligo（绿色）和一个 flap-probe oligo (深/浅紫色)进行杂交，flap-probe oligo 5’端包含一段不互补的固定序列（浅紫色），这段序列形成了flap。

Oligos与PCR产物相杂交会形成以上两种结构中的其中一种结构，当然这取决于基因编辑的结果。 当基因编辑成功发生时，flap-probe oligo在靶标位点形成完全的碱基配对，这时候产生的结构是一个double-flap结构。Double-flap结构由Guide-it™ Flap Detector识别检出，Guide-it™ Flapase核酸酶特异性剪切并释放出flap，从而产生荧光信号。

当没有发生基因编辑时，flap-probe oligo在靶标位点不会形成完全的碱基配对，从而形成一个带有缺口的结构，这个结构不能被Guide-it™ Flapase核酸酶剪切，也就不会产生荧光信号。通过这种方式，使用Guide-it™ SNP Screening Kit检测荧光信号就可以确认是否发生了预期的核苷酸替换。

随着科研水平的发展和客户需求的不断提升，Takara一直在对CRISPR/Cas9产品进行全面优化，为成功的基因编辑实验保驾护航！

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