In-Fusion系列 全新活动 惊喜折扣
您听说过无缝克隆技术么！无缝克隆与传统克隆方法最大的区别在于，可以在任意载体的任意位置进行单片段或多片段的定向克隆，将复杂的酶切克隆操作简化为一步无缝克隆反应，大大提高您的实验效率。接下来就让我给您介绍一下我们专属的无缝克隆技术，In-Fusion无缝克隆！
In-Fusion无缝克隆原理
In-Fusion依靠载体和插入片段的末端的同源序列完成无缝克隆。
1、在载体的插入位点，可以通过限制酶酶切或反向PCR的方法，将载体线性化。
2、将线性化载体末端的15 bp序列，添加到插入片段的PCR引物5’端，PCR后即可得到末端和载体同源的插入片段。
3、在In-Fusion酶的作用下，15 min即完成克隆，反应液转化到大肠杆菌，第二天即可进行阳性菌落验证。
市面上的无缝克隆技术多种多样，我们的In-Fusion又有哪些优势呢，且听我给您一一道来。
■ 可顺利连接末端带A碱基的PCR产物，不影响连接效率
■ 无连接酶 大大降低背景
■ 无聚合酶 大概率减少错配发生的可能
■ 反应迅速 比传统连接酶方法节省约1天时间
■ Takara提供在线In-Fusion引物设计工具，轻松设计带同源臂的In-Fusion克隆专用引物
■ 载体类型不受限制，慢病毒、腺病毒、逆转录病毒载体等均可使用
■ 使用In-Fusion可以进行单片段插入、多片段插入、定点突变、片段删除或替换等
■ 高效率和高准确性，减少反复构建载体，亚克隆，筛选阳性菌落等所需的时间、试剂、人力成本
■ 已被广泛应用于慢病毒载体的构建，CRISRP/Cas9相关载体的构建，抗体工程研究中的高通量克隆、大的表达质粒的构建、插入小的融合蛋白质标签等
In-Fusion Cloning：连接酶的高效率高准确度替代方法
数据提供
研究1：Ti-yu Lin，Graduate Student. Univ. of Wisconsin-Madison.
研究2：Madhusudan Rajendran，Research Assistant. Univ. of Wisconsin-Madison.
实验简介：
在下面这些研究中，In-Fusion Cloning 被用于传统克隆连接酶方法不成功的克隆实验。两个实验都使用了pET载体，这是一种常用的体内重组蛋白质表达系统。当使用连接酶时，两位研究人员都无法克隆想要的片段；Ti-yu Lin的目的片段为~1 kb并高GC含量（67%GC），Madhusudan Rajendran使用编码novobiocin抗性的大插入片段（gyrase B；2.4 kb）。
使用In-Fusion克隆，两位科学家都能够有效地将其片段克隆到限制酶消化的线性化载体中，通过菌落PCR筛选确定阳性克隆。虽然每个项目的具体细节都有不同挑战，但结果是相同的：In-Fusion克隆技术在第一次尝试时就产生了阳性克隆，且大幅缩短实验时间。
实验结果：
PCR扩增目的的片段显示了两个正确大小的单一条带（图1），将这些片段克隆到它们各自的载体中（图2），随后通过菌落PCR分析。对于研究1，由In-Fusion克隆方法产生的10个菌落中的8个是阳性克隆。对于研究2，32个筛选的菌落中有21个是阳性克隆。在这两种情况下，研究人员都能够成功地将目的基因进行克隆。
结论：
先前基于连接酶方法的克隆工作未能产生令人满意的结果，但使用In-Fusion HD Cloning Plus后，两个独立的项目都得到了阳性克隆。在每次尝试中，两位研究人员都能够成功的将其具有挑战性的插入片段克隆到pET表达载体中。
| In-Fusion除了保持高性能外，自身也在不断升级→ |
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In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD性能比较。分别使用In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD将五个不同的插入片段（大小从405 bp到1,005 bp不等）同时克隆到一个经反向PCR线性化的2.7 kb的载体中，每组克隆反应重复三次。两个反应系统除了酶预混液不同之外，扩增引物和其他试剂全部相同。转化涂菌后显示Snap Assembly组长出的菌落数是HD组的4倍，挑取10个转化菌落，进一步使用Sanger测序法进行验证，结果显示二者正确率均超过90%。
正值Takara中国三十周年纪念，我们决定春促期间(2023.3.1-4.30)推出全新活动，为您的克隆实验保驾护航：
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In-Fusion 讲座链接：
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In-Fusion引物设计工具链接：
Primer design and other tools (takarabio.com)
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