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表1. Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow的一般特征

基架 6%高交联琼脂糖
配基类型 空间连接臂Butyl-S:-S (CH2)3 - CH3
颗粒形式 刚性,球状,大孔
平均颗粒大小 90 mm直径
粒度分布 45-165 mm
配基密度 8.9-11.3 mmole配基/ml介质

pH 稳定性

 
  工作范围
  清洗范围
3-13
2-14
化学稳定性

在常用的水溶液缓冲液中稳定:
1 M HCl,1 M NaOH,30%异丙醇,50%乙二醇,70%乙醇,3 M硫酸钠,6 M盐酸胍,8 M脲

高压灭菌 0.05 M磷酸钠缓冲液,pH 7.0 121℃,20 min
流速,在25℃,0.1 M 大约400 cm/h,1 bar (100 kpa,14.5
NaCl 流动相 psi),柱XK 50/30,床高15 cm
操作温度 4-40℃

在图1中比较了Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow与Butyl Sepharose 4 Fast Flow 的选择性。

柱: 尺寸10 mm x 10 cm,装床体积= 5.9 ml
缓冲液A: 0.02 Tris-HCl, 1.7 M 硫酸铵pH 7.5
缓冲液B: 0.02 Tris-HCl, pH 7.5
流速: 1 ml/min (76 cm/h)
梯度: 0-100% B , 10 CV
系统: ÄKTAFPLC™

图1. 比较了Butyl-S Sepharose 4 Fast Flow (红线) 和

 

Butyl Sepharose 6 Fast Flow (兰线) 分离四个蛋白样品,洗脱的次序为: 细胞色素C,RNAase A,溶菌酶和a -胰凝乳蛋白酶原。

图2 比较了各种Sepharose HIC 的选择性,Butyl-S-Sepharose Fast Flow 6 为最弱的疏水介质,Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow (高取代) 为最强的疏水介质。

柱: 尺寸10 mm x 10 cm,装床体积= 5.9 ml
缓冲液A: 0.02 Tris-HCl, 1.7 M 硫酸铵pH 7.5
缓冲液B: 0.02 Tris-HCl, pH 7.5
流速: 1 ml/min (76 cm/h)
梯度: 0-100% B , 10 CV
系统: AKTAFPLC™

图2. 用Sepharose HIC进行选择性和分辨力的筛选。样品洗脱次序:细胞色素C,RNAase A,溶菌酶和α-胰凝乳蛋白酶原。Butyl-S Sepharose 6 Fast Flow是GE Healthcare生产的最弱疏水性介质,最适用于疏水性强的分子的纯化,如单抗,回收率高并且减少蛋白变性的危险。

 
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