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为检测临床样本中毛霉菌，研究人员对比 SYBR Green 和 TaqMan 探针 RT-qPCR，发现前者诊断毛霉菌病更可靠。
毛霉菌病（Mucormycosis）是一种真菌性急症，因其具有侵袭性、进展迅速以及较高的发病率和死亡率，对新冠（COVID-19）患者和非新冠患者都构成了严重威胁。这凸显了及时检测和处理的重要性。在这项研究中，研究人员探究了实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测临床样本中毛霉目（Mucorales）真菌的效用，并评估了 SYBR Green 和 TaqMan 探针 RT-qPCR 在扩增毛霉目特异性 18S rDNA 基因方面的性能。研究人员以氢氧化钾（KOH）直接镜检作为毛霉菌病实验室诊断的标准进行准确性分析，此外，还将检测结果与培养法和双重聚合酶链式反应（PCR）进行了对比。
研究人员使用毛霉目特异性寡核苷酸优化了 SYBR Green 和 TaqMan RT-qPCR，以扩增保守的 18S rDNA 靶标。从 120 例疑似侵袭性真菌感染的新冠患者的鼻窦标本中提取 DNA，用于分子诊断。将两种 RT-qPCR 检测的结果与直接显微镜检查、培养以及毛霉目特异性双重 PCR 检测的结果进行了比较。
结果显示，SYBR Green 实时荧光定量 PCR 产生了独特的解链温度（Tm）模式（80.24±0.70°C），在 120 例临床样本中检测到 51 例毛霉目真菌。与诊断毛霉菌病的标准方法 ——KOH 直接镜检相比，SYBR Green PCR 的敏感性为 91.67%（95% 置信区间（CI）：86.7 - 96.5%），特异性为 90.28%（95% CI：84.9 - 95.5%）。相比之下，TaqMan 探针 PCR 在 120 例样本中检测到 34 例毛霉目真菌，敏感性为 64.58%（95% CI：56 - 73.1%），特异性为 95.83%（95% CI：92.26 - 99.39%）。
研究得出结论，基于 SYBR Green 的 PCR 可作为诊断毛霉菌病的可靠确证检测方法，尤其适用于菌丝不典型、混合感染（同时存在有隔和无隔菌丝），或者直接镜检阳性但培养结果为阴性的情况。TaqMan 探针 PCR 敏感性较低，可能是由于使用简并探针等因素导致假阴性结果。
