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8月冷泉港实验手册聚焦干细胞[创新技巧]

【字体: 时间:2009年08月07日 来源:生物通

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  生物通报道,8月初,冷泉港照例发布了新一期的实验手册。这次的免费大餐都是关于干细胞的,一是利用睡美人转座系统在小鼠胚胎干细胞中实现稳定的基因表达;二是关于定向的造血干细胞转导。

生物通报道,8月初,冷泉港照例发布了新一期的实验手册。这次的免费大餐都是关于干细胞的,一是利用睡美人转座系统在小鼠胚胎干细胞中实现稳定的基因表达;二是关于定向的造血干细胞转导。请点击文章标题查看。

Protocol 1

Use of the Sleeping Beauty Transposon System for Stable Gene Expression in Mouse Embryonic Stem Cells

简介:睡美人(SB)转座系统由两个成分组成,一个是转座酶,另一个是包含反向重复/正向重复(IR/DR)序列的转座子质粒,能精确整合到TA二核苷酸中。将目的表达框放入IR与DR间,SB转座酶会介导稳定的整合,从而长期表达目的基因。最近,研究表明睡美人转座系统能介导人胚胎干细胞中的基因转移和稳定基因表达。于是,密歇根大学的研究人员就奉献出在小鼠胚胎干细胞中转染并建立稳定细胞系的方法。

上图即为睡美人转座系统的示意图。SB包含了转座酶来源(mRNA或DNA)和转座子质粒,质粒上带有IR/DR序列,中间夹着目的片段。一旦转座酶表达,它就识别并结合IR/DR,催化TA靶位点的精确整合。一旦整合,TA二核苷酸就复制,而转基因以单个拷贝整合在基因组中。

Protocol 2

Hematopoietic Stem Cell Targeting with Surface-Engineered Lentiviral Vectors

简介:此份实验手册改编自冷泉港出版社《Gene Transfer: Delivery and Expression of DNA and RNA》。用展示HSC-激活多肽,干细胞因子(SCF)和促血小板生成素(TPO)的载体特异性转导造血干细胞(HSC),并在非肥胖型糖尿病/重症综合性免疫缺陷的小鼠模型中评估定向的HSC转导。

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