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Odyssey® 双色红外激光成像系统助力疫苗研发

【字体: 时间:2021年04月13日 来源:基因有限公司

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  Odyssey®双色红外激光成像系统可以让Western Blot定量结果更准确、重复性更高,可实现6块微孔板高通量扫描成像,能更好地助力疫苗研发。接下来我们与您一起分享Odyssey®双色红外激光成像系统助力寨卡病毒DNA疫苗研发的一篇文献。

DNA疫苗以及重组蛋白疫苗、mRNA疫苗、病毒载体等疫苗研发过程中都需要进行Western Blot实验来检测目的蛋白(抗原/抗体)是否表达、表达的特异性、表达量的高低以便筛选高表达珠。Odyssey®双色红外激光成像系统可以让Western Blot定量结果更准确、重复性更高,可实现6块微孔板高通量扫描成像,能更好地助力疫苗研发。接下来我们与您一起分享Odyssey®双色红外激光成像系统助力寨卡病毒DNA疫苗研发的一篇文献。

2019年,美国Wistar研究所在Molecular Therapy杂志上发表了题为“In Vivo Delivery of a DNA-Encoded Monoclonal Antibody Protects Non-Human  primates against Zika Virus”的文章,该团队将DNA编码的抗寨卡病毒的单克隆抗体合成质粒 DMAb-ZK190 注射到小鼠和恒河猴体内,有效控制了寨卡病毒的感染。该研究在全球范围内首次证明体内输送编码单克隆抗体的核酸可有效控制非人灵长类动物(NHPs)体内的传染病。

此项研究于2016年获得了Bill & Melinda Gates基金会8,755,120美金的资助。以此研究为基础,Wistar研究所与Inovio制药公司开展合作并于2019年2月20号宣布启动预防寨卡病毒感染的DNA编码单克隆抗体(dMAb)技术的首项人体试验,此项研究促进了抗体技术的重大飞跃。

文章摘要

寨卡病毒感染是一种地方病,但在许多其他地区季节性爆发的风险也很高。将编码单克隆抗体的合成质粒递送到体内进而表达单克隆抗体是有效控制病毒感染的一种方法。作者利用基因工程技术设计了编码mAb ZK190中和抗体的合成质粒DMAb-ZK190,该质粒编码的单克隆抗体靶向结合寨卡病毒E蛋白DIII结构域。体内递送的DMAb-ZK190 DNA质粒在小鼠体内持续表达超过10周,在非人灵长类动物(NHPs)中持续表达超过3周,有效防止了寨卡病毒的感染。这项研究首次证明体内输送编码单克隆抗体的核酸可有效控制非人灵长类动物(NHPs)体内的传染病,也证明了这一研究平台的重要性。

作者利用Western Blot实验验证DMAb-ZK190和DMAb-ZK190-LALA编码的单克隆抗体是否与Zika病毒E蛋白结合。


Figure 1 E、F:Western Bot实验验证小鼠血清中DMAb-ZK190和DMAb-ZK190-LALA编码的单克隆抗体与Zika病毒 E蛋白的结合。向C57BL/6小鼠注射200mg ZK190(A)或者ZK190 LALA(B)质粒,对注射有ZK190(A)或者ZK190 LALA(B)小鼠的血清样品评估,以确认ZK190单克隆抗体与Zika病毒E蛋白的结合Western blots were cropped for clarity (white bar) (E and F) 。

作者利用体外In-Cell Western™ 中和实验测定DMAbZK190和DMAb-ZK190-LALA体外中和活性,发现体内由DMAb产生的ZK190单克隆抗体很有效,保持了中和寨卡病毒感染的功效。


Figure 4:体外In-Cell Western™ 中和实验体测定DMAbZK190和DMAb-ZK190-LALA体外中和活性,结果(a)(b)(c)分别为评估注射了DMAbZK190、DMAb-ZK190-LALA或阴性对照小鼠第7天梯度稀释血清中ZK190单克隆抗体阻断寨卡病毒PR209感染Vero细胞的能力。非线性回归分析确定中和感染血清中的DMAb浓度,实验组与对照组(仅接受病毒未注射DMAbZK190、DMAb-ZK190-LALA)相比,中和率(阻断病毒感染细胞能力)达50%,“ n”是指生物学重复。

以上Western Blot和In-Cell Western™中和检测均是在LI-COR Odyssey®CLx双色红外激光成像系统上进行成像与分析的。

关于In-Cell Western

In-Cell Western™ 是一种直接在微孔板内(96/384孔板)对细胞内目标蛋白进行定量免疫荧光检测的方法。In-Cell Western™无需进行裂解细胞、制胶、电泳、转膜等步骤,不仅节省了大量时间,而且大大提升了实验通量和重复性,能更好地助力疫苗研发。

微孔板内的细胞经过固定、透化、一抗、二抗孵育、洗涤等步骤后,即可进行微孔板扫描成像实现对细胞内目标蛋白的精确定量。


关于LI-COR Biosciences

LI-COR Biosciences公司作在近红外荧光成像领域已有25年的丰富历史,25年来,LI-COR Odyssey ®双色红外激光成像系统由于可实现Western Blot精确定量,多重Western Blot检测,提高重复性,得到了全球生物医学研究人员的信赖。

极其丰富的应用

LI-COR Biosciences公司在近红外荧光成像领域已有25年的丰富历史,LI-COR 与基因有限公司的终极目标是希望帮助您解决Western Blot实验中的问题,帮助您获得符合杂志发表的要求的可重复Western Blot数据。

基因有限公司作为LI-COR产品中国区代理商,与LI-COR一起邀请您关注近红外荧光成像技术在Western Blot准确定量、磷酸化等蛋白修饰化研究、In-Cell Western、双色EMSA、蛋白芯片及光免疫疗法等方面的应用进展。欲进一步了解详细内容,请关注我们的官方微信“基因快讯”或联系您身边的基因有限公司工作人员。

参考文献:
[1]Rianne N.Esquivel,Ami Patel,Sagar B.Kudchodkar.et al.2019.In Vivo Delivery of a DNA-Encoded Monoclonal Antibody Protects Non-human Primates against Zika Virus.Molecular Therapy Vol.27 No 5 May 2019.

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