lncRNA RMRP通过调控PD-1表达影响NK细胞功能的新机制及其免疫治疗意义

《Scientific Reports》：LncRNA RMRP knockdown upregulates PD-1 expression in natural killer cells

本研究针对自然杀伤（NK）细胞中长链非编码RNA（lncRNA）的调控机制展开探索。研究人员通过功能分析发现，敲低RMRP可显著上调NK细胞表面免疫检查点PD-1的表达，揭示RMRP可能通过抑制PD-1参与NK细胞功能调控。该研究为基于NK细胞的免疫治疗提供了新的靶点和理论依据。

在人体免疫系统中，自然杀伤（Natural Killer, NK）细胞作为先天免疫的重要效应细胞，在清除病毒感染细胞和肿瘤细胞中发挥着关键作用。然而，NK细胞的功能受到多种调控因子的影响，其中免疫检查点分子程序性死亡蛋白-1（Programmed Death-1, PD-1）的异常表达可导致NK细胞功能抑制，进而影响抗肿瘤免疫应答。近年来，长链非编码RNA（long non-coding RNA, lncRNA）作为基因表达的重要调控因子，在免疫细胞中的功能逐渐受到关注，但其在NK细胞中的作用机制尚不明确。

为解决这一问题，由Sarah Abouhegaziah等人组成的研究团队在《Scientific Reports》上发表了一项研究，聚焦于五种lncRNA（MALAT1、RMRP、LINC-PINT、GAS5和LINC00299）在NK细胞中的表达及功能。研究人员通过体外培养人原代NK细胞，结合细胞因子刺激、基因敲低和多参数流式细胞术等技术，发现RMRP的表达下调与PD-1的上调存在显著关联，提示RMRP可能作为PD-1的负调控因子，参与NK细胞的功能调节。

本研究主要采用了以下关键技术方法：从健康 donor 外周血单核细胞（PBMC）中分离原代NK细胞并进行体外扩增培养；使用定量聚合酶链反应（QPCR）检测lncRNA表达水平；通过反义寡核苷酸 Gapmer 敲低技术实现RMRP的特异性抑制；运用多色流式细胞术分析NK细胞表面受体（包括PD-1）及功能分子（如IFN-γ、CD107a、MIP-1β）的表达。

研究结果如下：

Selection of lncRNAs candidates for functional analysis

通过RNA测序数据筛选出NK细胞中高表达的五种lncRNA，包括MALAT1、RMRP、LINC-PINT、GAS5和LINC00299，这些分子在多种癌症中已被报道具有促癌或抑癌作用。

Downregulation of RMRP in primary cultured NK cells

与新鲜分离的NK细胞相比，体外培养的NK细胞中所有五种lncRNA均显著下调，其中RMRP的下调幅度最大（25倍），表明培养过程可能影响lncRNA的表达模式。

Cytokine stimulation downregulated RMRP expression in NK cells

在使用IL-2/IL-15或IL-12/IL-18刺激NK细胞后，RMRP等lncRNA的表达进一步下调，其中RMRP在IL-2/IL-15刺激组下调幅度达7.5倍，提示细胞因子激活状态可能与lncRNA表达密切相关。

RMRP knockdown did not affect NK cell functionality

尽管成功敲低RMRP（效率达80%），但NK细胞的脱颗粒（CD107a）、细胞因子（IFN-γ）和趋化因子（MIP-1β）分泌功能未发生显著改变，表明RMRP可能不直接调控NK细胞的效应功能。

RMRP knockdown increased PD-1 expression in NK cells

流式细胞术分析显示，RMRP敲低后NK细胞表面PD-1表达显著上升，而其他激活性或抑制性受体未见明显变化。该结果在4个不同 donor 和不同培养时间点均得到验证，初步证实RMRP与PD-1之间存在负调控关系。

在讨论部分，作者指出RMRP作为一种定位于细胞核和细胞质的lncRNA，在多种癌症中发挥促癌作用，但其在NK细胞中的功能尚未见报道。本研究首次发现RMRP可能通过抑制PD-1表达参与NK细胞免疫检查点调控。值得注意的是，健康人循环NK细胞通常不表达PD-1，但存在胞内PD-1 mRNA和蛋白，提示RMRP可能影响PD-1的膜表达过程。此外，先前研究显示IL-12、IL-15、IL-18等细胞因子可诱导NK细胞表面PD-1表达，与本研究中RMRP在细胞因子刺激下下调的结果相一致，进一步支持了RMRP与PD-1的负向关联。

尽管该研究仍存在样本量有限、PD-1调控机制未完全阐明等局限性，但其结果为进一步探索lncRNA调控NK细胞免疫检查点的分子机制奠定了基础。由于PD-1是当前肿瘤免疫治疗的重要靶点，针对RMRP–PD-1轴的研究可能为增强NK细胞抗肿瘤功能提供新策略，具有重要的转化价值。