血根碱与阿霉素通过靶向HSPA5诱导内质网应激抑制乳腺癌的新机制

本研究针对乳腺癌中异常高表达的内质网伴侣蛋白HSPA5（GRP78/BiP）所介导的肿瘤生长、生存及耐药性问题，由研究人员开展了血根碱（SAN）与阿霉素（DOX）联合靶向治疗研究。结果表明，SAN与DOX能强效抑制HSPA5-ATPase活性（IC50分别为8.6 μM、6.7 μM，联合用药为3.02 μM），并显著降低HSPA5表达，通过诱发严重内质网应激（ER stress）和过量活性氧（ROS）导致细胞晚期凋亡。该研究为乳腺癌治疗提供了新的联合用药策略和理论依据。

　　

内质网（Endoplasmic Reticulum, ER）伴侣蛋白——热休克蛋白家族A成员5（HSPA5，也称为GRP78或BiP），是调控未折叠蛋白反应（Unfolded Protein Response, UPR）的关键分子。在乳腺癌（Breast Cancer, BC）中，HSPA5的表达出现异常增高，这种异常与肿瘤的生长、存活、耐药性以及转移过程密切相关。因此，它成为了一个极具潜力的乳腺癌治疗靶点。

本研究对HSPA5在不同乳腺癌亚型中的表达进行了全面分析，并深入探讨了血根碱（Sanguinarine, SAN）与阿霉素（Doxorubicin, DOX）联合使用对乳腺癌细胞中HSPA5的活性和表达所产生的影响。研究人员利用多个公共数据库，广泛分析了HSPA5在乳腺癌亚型中的表达情况，并评估了HSPA5表达及其基因组改变对患者生存模式的影响。对GEO数据集的分析显示，SAN和DOX处理能够下调MCF-7细胞中与转移相关的关键通路和基因（包括HSPA5），并调节免疫原性细胞死亡（Immunogenic Cell Death, ICD）相关基因。

此外，通过计算机模拟对接（in silico docking）和分子动力学（Molecular Dynamics, MD）模拟，研究人员评估了SAN、DOX以及两者组合与HSPA5的ATP结合域之间的相互作用。随后，通过生物化学实验和基于ELISA的检测方法，在MCF-7细胞中评估了SAN、DOX及其组合对HSPA5活性和表达的影响。

研究结果表明，与正常组织相比，HSPA5在原发性和转移性乳腺癌组织中均存在异常过表达。HSPA5表达升高及其遗传和表观遗传改变与乳腺癌患者总生存期（Overall Survival, OS）缩短相关。对接和分子动力学模拟研究揭示，SAN、DOX及其组合与HSPA5之间存在强大而稳定的相互作用。生化及ELISA实验结果证实，SAN和DOX能显著抑制MCF-7细胞中HSPA5-ATPase的活性，其效果类似于HSPA5抑制剂HA15，测得的IC₅₀值分别为8.6 μM、6.7 μM和3.02 μM。在各自IC₅₀及半IC₅₀浓度下，SAN、DOX及其组合使总HSPA5和细胞表面HSPA5的表达量降低了50%以上，同时降低了MCF-7细胞的活力并破坏了细胞膜的完整性。这种药物组合通过诱导严重的内质网应激和过量的活性氧（Reactive Oxygen Species, ROS），最终导致了细胞的晚期凋亡。

这项研究为理解SAN与DOX联合作用于HSPA5在乳腺癌治疗中的效果提供了新的见解。