清育阳精方通过调控HPG轴与抑制睾丸氧化应激及细胞凋亡改善环磷酰胺诱导的少弱精子症研究

《Journal of Ethnopharmacology》：Qingyu Yangjing formula ameliorates cyclophosphamide-induced oligoasthenospermia by regulating the hypothalamic-pituitary-gonadal axis and inhibiting testicular oxidative stress and apoptosis in rats

本研究针对环磷酰胺(CP)诱导的少弱精子症(OAS)模型，系统探讨清育阳精方(QYYJF)的治疗机制。通过UPLC-Q-TOF-MS/MS鉴定出血中515种原型成分，发现QYYJF可显著改善精子密度和活力，恢复下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)激素平衡，降低睾丸组织氧化应激指标MDA、ROS，提升SOD、GSH-PX活性，并抑制Bax/Caspase-3凋亡通路。该研究为中医药治疗男性不育提供了药效物质基础和分子机制证据。

在全球范围内，男性不育已成为影响15%育龄夫妇的公共卫生问题，其中少弱精子症（OAS）是导致男性不育的主要病因。随着肿瘤发病率的上升，化疗药物环磷酰胺（CP）在临床广泛应用的同时，其生殖毒性导致的精子数量减少和活力下降问题日益凸显。目前西医主要采用左卡尼汀、维生素E等药物治疗，但存在疗效不稳定和不良反应等局限。基于"肾藏精、主生殖"理论的中医药在治疗男性不育方面展现出独特优势，清育阳精方（QYYJF）作为江苏省中医院的经验方，在临床应用中显示出改善精子质量的显著疗效，但其药效物质基础和作用机制尚不明确。

为系统揭示QYYJF的治疗机制，研究团队在《Journal of Ethnopharmacology》发表的最新研究中，采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）等技术，从血中移行成分鉴定、药效评价及分子机制等多维度展开探索。研究人员首先通过灌胃给予大鼠QYYJF（11.55 g/kg）5天后采集血清，利用UPLC-Q-TOF-MS/MS分析鉴定血中移行成分；随后建立CP诱导的OAS大鼠模型，设低、中、高剂量（5.77、11.55、17.32 g/kg/d）QYYJF治疗组，采用马氏计数板评估精子参数，ELISA法检测血清HPG轴激素（T、FSH、LH、GnRH、E₂）和睾丸组织氧化应激指标（SOD、MDA、GSH-PX、ROS）及炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β），HE染色观察睾丸组织病理变化，Western Blot检测凋亡相关蛋白（Bcl₂、Bax、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9）表达。

化学成分分析

研究共鉴定出515种血中移行成分，其中25种完成结构鉴定，主要包含黄酮类、三萜皂苷类、苯丙素类和内酯类化合物。成分分析表明QYYJF含有丰富的抗氧化和抗凋活性成分，为阐释其药理作用提供了物质基础。

对精子参数的影响

CP模型组精子密度和活力显著降低，而QYYJF各剂量组均能剂量依赖性地改善这些参数。中、高剂量组效果尤为显著，表明QYYJF能有效逆转CP对精子发生的抑制作用。

对HPG轴激素的调节

CP导致血清T、FSH、LH、GnRH水平紊乱，E₂异常升高。QYYJF治疗可恢复这些激素的正常水平，特别是中剂量组能显著提升T浓度，降低E₂水平，提示其通过调控HPG轴功能改善生精微环境。

对抗氧化应激的作用

CP诱导的氧化应激表现为睾丸组织MDA和ROS水平显著升高，SOD和GSH-PX活性降低。QYYJF治疗能剂量依赖性地逆转这些变化，其中高剂量组使SOD活性恢复至接近正常水平，MDA含量显著降低，表明其具有较强的抗氧化能力。

对炎症因子的影响

CP模型组炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平显著升高，QYYJF治疗组这些因子水平明显下降，提示其抗炎作用也是改善睾丸损伤的重要机制。

组织病理学观察

HE染色显示CP模型组生精小管结构紊乱，生精细胞层数减少，管腔内精子数量显著减少。QYYJF治疗组生精上皮排列较整齐，生精细胞层次增加，管腔内可见更多成熟精子，表明睾丸组织形态学得到改善。

对细胞凋亡的调控

Western Blot结果显示CP模型组促凋亡蛋白Bax、cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9表达上调，抗凋亡蛋白Bcl₂表达下降。QYYJF治疗可剂量依赖性地逆转这些蛋白的表达变化，抑制生精细胞凋亡。

本研究通过整合化学成分分析和多维度药效评价，系统阐明了QYYJF治疗CP诱导OAS的作用机制。研究发现QYYJF可通过多种途径发挥治疗作用：一是调控HPG轴激素分泌，改善生精内分泌环境；二是减轻睾丸组织氧化损伤，提高抗氧化酶活性；三是抑制炎症反应和生精细胞凋亡。这些作用共同促进了精子发生过程的恢复，从而改善精子质量和数量。该研究不仅为QYYJF的临床应用提供了科学依据，也为中医药治疗男性不育的机制研究提供了新思路。通过明确血中移行成分，为质量标志物的确定奠定了基础，而多靶点作用机制的揭示则展现了中医药整体调节的优势特色，对推动中医药现代化和国际化具有重要意义。