达格列净通过下调ENKUR/PI3K/AKT信号通路改善高糖诱导的腹膜纤维化

《Scientific Reports》：Dapagliflozin ameliorates high glucose-induced peritoneal fibrosis through downregulation of ENKUR/PI3K/AKT signaling pathway

本研究针对腹膜透析(PD)患者面临的高糖诱导腹膜纤维化(PF)这一临床难题，探索了SGLT2抑制剂达格列净(DAPA)的保护机制。研究人员通过体内外实验证实，DAPA通过调控ENKUR/PI3K/AKT信号通路，显著抑制上皮-间质转化(EMT)过程，改善腹膜超滤功能，为PF治疗提供了新的靶向治疗策略。

腹膜透析的革命性突破：达格列净如何重塑纤维化治疗新格局

在终末期肾病(ESRD)的治疗领域，腹膜透析(PD)作为一种重要的肾脏替代疗法，凭借其高效的中大分子毒素清除能力和持续的水分调节功能，为全球数百万患者带来生机。然而，这场生命接力赛却面临着一个严峻挑战——长期使用高葡萄糖腹膜透析液会引发腹膜纤维化(PF)，导致腹膜超滤功能衰竭，最终迫使患者退出PD治疗。

尽管目前临床尝试使用糖皮质激素和他莫昔芬等药物干预，但疗效有限且证据不足。问题的核心在于高糖环境会触发人腹膜间皮细胞(HPMCs)发生上皮-间质转化(EMT)，使原本具有上皮特征的细胞转化为成纤维细胞，大量产生胶原蛋白IV(COL-IV)和纤维连接蛋白(FN)等细胞外基质成分，最终导致腹膜增厚和功能丧失。然而，这一过程的具体分子机制尚未完全阐明，缺乏有效的靶向治疗策略。

近年来，钠-葡萄糖协同转运蛋白2(SGLT2)抑制剂达格列净(DAPA)在糖尿病治疗中展现出多重获益，其在非糖尿病领域的肾脏和心血管保护作用也日益受到关注。更有趣的是，研究发现SGLT2在HPMCs中也有表达，提示这类药物可能对腹膜具有直接保护作用。但其中的具体机制如同一个黑箱，亟待探索。

与此同时，另一个关键分子——Enkurin(ENKUR)逐渐进入研究者视野。这种钙离子通道适配蛋白因其富含脯氨酸的N端结构域，能够直接与PI3K的p85调节亚基结合，在多种肿瘤的EMT过程中发挥重要作用。郑州大学肾脏病研究所团队前期的初步研究发现，在高糖诱导的HPMCs转分化模型中，ENKUR、PI3K和AKT的表达均显著上调，而ENKUR沉默可缓解EMT过程。这些线索如同拼图一般，指引着研究人员揭开DAPA保护作用的神秘面纱。

在这项发表于《Scientific Reports》的研究中，刘家汉、徐欣欣等研究人员开展了一系列精巧的实验，首次揭示了DAPA通过ENKUR/PI3K/AKT通路对抗高糖诱导腹膜纤维化的新机制。

关键技术方法概述

本研究整合了多种实验技术平台：从长期PD患者的腹膜透析液中分离原代HPMCs建立细胞模型；采用5/6肾切除联合高糖腹膜透析液灌注构建大鼠PF模型；通过免疫组化、Western blot和qRT-PCR评估纤维化和信号通路相关标志物；利用CCK-8法检测细胞活力；通过慢病毒转染实现ENKUR过表达；采用免疫共沉淀技术验证SGLT2与ENKUR的相互作用。

表达谱分析揭示临床相关性

研究人员首先从不同透析龄患者的腹膜透析液中分离HPMCs，发现随着透析时间延长，细胞形态从鹅卵石样向上皮样转变为纺锤形纤维细胞样。

免疫荧光鉴定显示细胞波形蛋白染色阳性，而因子VIII和CD45阴性，证实其为间皮细胞来源。Western blot和qRT-PCR分析表明，长期PD患者HPMCs中上皮标志物E-钙黏蛋白下调，间质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和COL-IV上调，且SGLT2、ENKUR表达及PI3K、AKT磷酸化水平均显著升高，提示EMT过程与ENKUR/PI3K/AKT通路激活密切相关。

DAPA改善腹膜结构和功能

在尿毒症大鼠PD模型中，口服DAPA(1 mg/kg)显著减轻了高糖透析液(HG-PDF)引起的腹膜增厚和胶原沉积。

Western blot和qRT-PCR结果进一步证实DAPA能降低纤维化标志物表达，减轻高糖诱导的PF。

ENKUR/PI3K/AKT通路的关键作用

与假手术组相比，HG-PDF组大鼠腹膜组织中ENKUR表达显著升高，PI3K、AKT磷酸化水平增加。

DAPA治疗逆转了这些变化，表明其抗纤维化作用依赖于ENKUR/PI3K/AKT通路。

细胞水平验证作用机制

在高糖刺激的HMrSV5细胞中，DAPA以浓度依赖性方式提高细胞活力，降低ENKUR表达和PI3K/AKT通路活化。

机制研究表明，DAPA能抑制ENKUR过表达诱导的EMT增强。

免疫共沉淀证实SGLT2与ENKUR存在相互作用，DAPA显著抑制EMT过程中高糖刺激的ENKUR/PI3K/AKT通路表达。

研究结论与展望

本研究首次阐明DAPA通过下调ENKUR/PI3K/AKT信号通路改善高糖诱导腹膜纤维化的新机制。

长期高糖腹膜透析诱导腹膜间皮细胞转化为成纤维细胞，伴随腹膜增厚和胶原沉积，而DAPA通过抑制ENKUR/PI3K/AKT通路减轻这些病理改变。这一发现不仅揭示了ENKUR在腹膜纤维化中的新型作用，还为SGLT2抑制剂的非代谢获益提供了机制解释，为临床防治PD相关腹膜纤维化提供了新的治疗靶点和策略。

尽管研究存在SGLT2抑制剂影响ENKUR的具体机制尚未完全阐明、潜在通路探索不足、缺乏长期人体研究数据等局限性，但无疑为PF的精准治疗开辟了新方向。未来研究可进一步探索DAPA在其他器官纤维化中的作用，推动SGLT2抑制剂从降糖药向多器官保护剂的转变，最终改善终末期肾病患者的长期预后和生活质量。