基于cobas? 6800全自动平台的实时PCR检测方法优化：超声预处理提升耳念珠菌监测样本检测效率与成本效益研究

《Diagnostic Microbiology and Infectious Disease》：Optimizing a fully automated real-time PCR assay on the cobas? 6800 Platform for detection of Candida auris in surveillance samples pre-treated with sonication

本研究针对耳念珠菌（Candida auris）监测中传统培养法耗时长、灵敏度不足的问题，在cobas? 6800全自动平台上开发了超声预处理联合实时PCR（RT-PCR）检测方案。结果显示超声使检测限提升至7.51 CFU/mL，Ct值降低2.07周期（p<0.05），四合一混合检测在0.53%阳性率下可节约三倍成本。该方案为低流行区大规模筛查提供了高灵敏度、高通量的自动化解决方案。

随着全球范围内耳念珠菌（Candida auris）感染的持续蔓延，这种多重耐药真菌已成为世界卫生组织认定的关键优先病原体。其强大的医院内传播能力源于特殊的生物学特性：可在皮肤表面长期定植、在环境中存活数周，且对常用消毒剂耐受。香港自2019年报告首例输入病例后，本地感染率呈上升趋势，分离株均属Clade I型，对氟康唑和两性霉素B耐药，给临床治疗带来严峻挑战。

传统培养鉴定方法虽为金标准，但耗时长达2-7天，无法满足感染控制对快速响应的需求。尽管PCR技术可显著缩短检测时间，但现有方法多依赖繁琐的手工操作，如蛋白酶K孵育等裂解步骤。此外，在低流行率背景下大规模筛查面临成本效益挑战。为解决这些瓶颈，香港威尔士亲王医院微生物学研究团队开展了一项创新性研究，旨在验证cobas? 6800全自动平台检测耳念珠菌的性能，并探索超声预处理与混合检测策略的临床应用价值。

关键技术方法包括：1) 使用cobas? omni Utility Channel预配制试剂盒，靶向ITS2区域；2) 对235对临床拭子样本进行超声预处理对比；3) 采用59例RT-PCR阳性样本进行4合1混合检测验证；4) 以富集培养为金标准进行方法学比较。

研究结果

limits of detection, analytical specificity, and precision

通过概率单位分析确定，经超声预处理的临床菌株（Clade I）检测限为7.51 CFU/mL（95% CI: 5.27-20.22 CFU/mL），未超声样本为29.90 CFU/mL。对Clade II-IV菌株的检测限分别为19.83 CFU/mL（JCM15448）、12.38 CFU/mL（NCPF8971）和15.33 CFU/mL（NCPF8973），显示该方法具备广谱检测能力。精密性试验显示Ct值变异系数均<5%，且与40种常见病原微生物无交叉反应。

discussion

研究证实cobas? 6800系统检测耳念珠菌具有优异分析性能。超声预处理通过机械裂解细胞壁显著提高DNA得率，使阳性检出率从91.7%提升至95.8%，Ct值平均降低2.07周期（p<0.05）。4合1混合检测与单独检测的阳性符合率达79.7%，在0.53%阳性率条件下可降低三倍成本。计算表明，在12,978例筛查中通过混合检测发现14例阳性仅需追加242,995美元成本，远低于全员单独检测。

结论与意义

该研究成功建立了基于全自动平台的耳念珠菌分子检测体系。超声预处理技术的引入突破性地提高了检测灵敏度，而混合检测策略为低流行率场景下的经济高效筛查提供了新范式。这种自动化方案将检测流程整合至2.5小时内，大幅提升检测通量，为医疗机构实施入院筛查、阻断医院传播链提供了关键技术支持。研究成果对正处于耳念珠菌流行威胁地区的公共卫生防控体系具有重要实践价值。

（注：论文发表于《Diagnostic Microbiology and Infectious Disease》，作者单位香港威尔士亲王医院微生物科，研究符合赫尔辛基宣言并通过医院管理局中央伦理委员会审批[KW/EX-23-021]）