实时荧光定量PCR检测技术用于快速、精准地识别瓜蝇（Zeugodacus cucurbitae (Coquillett)，双翅目：实蝇科）

《Phytoparasitica》：Real-time PCR assay for the rapid and precise detection of the melon fly, Zeugodacus cucurbitae (Coquillett) (Diptera: Tephritidae)

瓜实蝇线粒体COI基因特异性SSP引物开发及检测应用研究。针对印度不同地理种群瓜实蝇形态重叠问题，设计ZCRP1F/ZCRP1R特异性引物，经交叉特异性、灵敏度（标准PCR 10pg/μl，实时PCR 1pg/μl）和产物长度（294bp）验证，兼容快速组织PCR，无需DNA提取，显著提升检疫效率。

　　

摘要

果蝇侵扰对全球葫芦科作物的生产构成了重大威胁，其中瓜果蝇（Zeugodacus cucurbitae）因其广泛的分布和严重的产量损失而成为最具危害性的物种之一。由于隐存物种复合体内成虫形态特征的相似性以及鉴定幼虫阶段的难度，准确识别Z. cucurbitae仍然具有挑战性。为了解决这一问题，我们开发了一种针对线粒体细胞色素c氧化酶亚基I（COI）基因的种特异性引物（SSP）检测方法，以实现Z. cucurbitae的精确鉴定。该SSP经过了多种测试，包括交叉特异性、灵敏度检测和实时PCR分析。结果表明，ZCRP1F/ZCRP1R引物在来自印度不同地理区域的样本中具有100%的准确率，并表现出高特异性，未与其他具有经济重要性的果蝇物种发生交叉扩增。灵敏度测试显示，在标准PCR条件下检测限低至10 pg/μl，在实时PCR条件下检测限低至1 pg/μl，扩增产物长度为294 bp。此外，该引物与Real Gene Tissue-Direct PCR试剂盒兼容，可以直接从昆虫组织中扩增DNA，无需进行DNA提取。这种简化的方法提高了诊断效率，减少了处理时间。所开发的检测方法在检疫检查、边境安全以及防止害虫入侵方面具有广泛的应用潜力，有助于改善害虫管理和生物安全措施。