STAT6抑制增强诱导性调节性T细胞稳定性并提升其在炎症性肠病中的治疗潜力

《Immunologic Research》：STAT6 inhibition stabilizes induced regulatory T cells and enhances their therapeutic potential in inflammatory bowel disease

本研究针对诱导性调节性T细胞(iTregs)在治疗应用中存在的不稳定性和功能不足问题，研究人员通过STAT6抑制剂AS1517499处理，成功增强了iTregs的Foxp3表达稳定性及免疫抑制功能。实验证明STAT6抑制能维持iTregs的表观遗传稳定性和抗炎因子表达，在DSS结肠炎模型中显著缓解疾病症状，且不促进结肠癌发展。该研究为Treg细胞疗法在炎症性肠病(IBD)的临床应用提供了新策略。

　　

在免疫学研究领域，调节性T细胞（Regulatory T cells, Tregs）一直是科学家们关注的焦点。这类细胞通过表达特征性转录因子Foxp3，在维持机体免疫平衡中扮演着"刹车"角色。然而，当研究人员尝试在体外诱导生成Tregs（iTregs）用于炎症性肠病（Inflammatory Bowel Disease, IBD）等自身免疫性疾病的治疗时，却面临着一个棘手难题：这些实验室培养的iTregs往往不够稳定，在炎症环境中容易"叛变"为效应T细胞，导致治疗效果大打折扣。

为什么iTregs如此难以保持"忠诚"？科学家们发现，STAT6信号通路可能是问题的关键。这条通路如同一个"破坏分子"，能够抑制Foxp3的表达，动摇iTregs的身份认同。更有趣的是，在STAT6基因敲除小鼠中，iTregs表现出更强的稳定性和功能。这一发现激发了研究人员的灵感：能否通过药物抑制STAT6，制造出更强大的治疗用iTregs？

带着这个问题，墨西哥国立自治大学的研究团队在《Immunologic Research》上发表了他们的最新研究成果。他们使用特异性STAT6抑制剂AS1517499，探索了药理抑制STAT6对iTregs稳定性及治疗功能的影响，为炎症性肠病的细胞治疗提供了新思路。

研究方法上，团队采用了多种技术手段：从Foxp3^EGFP报告基因小鼠中分离初始CD4⁺ T细胞进行iTregs诱导；通过流式细胞术分析细胞表面标志物；使用蛋白质印迹法检测STAT6磷酸化水平；采用实时定量PCR评估基因表达；进行体外抑制实验评估iTregs功能；并建立DSS诱导的结肠炎和结肠炎相关癌症（Colitis-Associated Cancer, CAC）模型进行体内疗效评估。

STAT6抑制稳定iTregs表型并增强其抑制程序

研究人员首先建立了iTregs诱导和扩增体系。初始CD4⁺ T细胞在TGF-β和IL-2存在下培养5天诱导分化为iTregs，随后在IL-2维持液中扩增，并在第7天加入STAT6抑制剂AS1517499处理72小时。令人惊喜的是，STAT6药理抑制使得iTregs在长达10天的培养中保持了高比例的CD4⁺Foxp3⁺细胞（约80%），而对照组则下降至59%以下。更重要的是，AS1517499处理的iTregs（AS-iTregs）表达更高水平的激活标志物CD25和抑制性受体PD-1、CTLA-4，这些分子都是Tregs发挥功能的关键。值得注意的是，AS1517499的效果与STAT6基因敲除相当，表明药理抑制足以模拟遗传缺陷的效果。

STAT6抑制使iTregs在应激条件下保持稳定并增强抑制功能

炎症环境是iTregs临床应用的主要挑战。当研究人员用促炎因子IL-6处理iTregs时，普通iTregs中Foxp3⁺细胞比例显著下降，而AS-iTregs则保持了稳定的表型。更令人鼓舞的是，体外抑制实验显示，AS-iTregs比普通iTregs具有更强的抑制CD4⁺ T细胞增殖的能力，特别是在高稀释度（1:3和1:7）下表现尤为突出。这表明STAT6抑制不仅稳定了iTregs的身份，还增强了其免疫功能。

STAT6抑制调控关键基因表达程序

分子机制层面，研究人员发现AS-iTregs中Foxp3、CTLA-4和PD-1的mRNA表达显著上调，同时抗炎细胞因子IL-10和TGF-β的表达也增加。而促炎因子IL-6和IL-1β的表达则下降超过50%。特别有趣的是，DNA甲基转移酶1（DNMT1）的表达在AS-iTregs中降低，这可能是通过表观遗传机制促进了Foxp3基因座的去甲基化，从而增强了iTregs的稳定性。

STAT6抑制增强iTregs对结肠炎的治疗作用

在氧化偶氮甲烷（Azoxymethane, AOM）/葡聚糖硫酸钠（Dextran Sulfate Sodium, DSS）诱导的结肠炎模型中，单次注射AS-iTregs就能显著缓解疾病症状：小鼠体重损失减少，疾病活动指数（Disease Activity Index, DAI）下降，结肠组织病理损伤减轻。组织学分析显示，AS-iTregs治疗组结肠上皮结构更完整，炎症细胞浸润减少，杯状细胞数量增加。免疫组化结果进一步证实，AS-iTregs治疗促进了结肠中Foxp3⁺ Tregs的浸润，同时减少了CD8⁺ T细胞的积累。

AS-iTregs抑制炎症而不促进肿瘤发展

安全性是细胞治疗的重要考量。在结肠炎相关癌症（CAC）模型中，多次注射AS-iTregs虽然能缓解炎症，但并不能完全阻止肿瘤发生。值得注意的是，与普通iTregs相比，AS-iTregs并没有表现出更强的促肿瘤作用，这减轻了人们对增强型iTregs可能因过度免疫抑制而促进肿瘤生长的担忧。

药理STAT6抑制在急性结肠炎中促进Treg介导的免疫调节

最后，研究人员直接在小鼠体内使用AS1517499，发现药物处理不仅能缓解DSS诱导的急性结肠炎，还能促进内源性Tregs的扩增和激活。AS1517499处理的小鼠中，CD4⁺Foxp3⁺ Tregs比例更高，表达CD25、IFN-γ和PD-1的活化Tregs亚群也增多，表明STAT6抑制在体内也能增强Tregs的稳定性和功能。

这项研究系统阐述了STAT6信号通路在调控iTregs稳定性中的核心作用，并证明药理抑制STAT6是一种可行的策略，能够增强iTregs的治疗潜力。AS1517499处理不仅提高了iTregs的Foxp3表达稳定性，还增强了其抑制功能和抗炎因子产生。在疾病模型中，AS-iTregs表现出优异的治疗效果，且不促进肿瘤发展。

然而，研究也留下了一些有待解答的问题。例如，STAT6抑制如何精确调控DNMT1表达？AS-iTregs的长期安全性如何？能否将这一策略与肠道归巢受体表达相结合，提高iTregs向炎症部位的靶向性？此外，将这一方法应用于人类iTregs的生成和扩增，也需要进一步优化条件。

这项研究的创新之处在于，它不仅证实了STAT6作为iTregs稳定性调控关键靶点的价值，还提供了将基础研究发现转化为治疗策略的成功范例。通过相对简单的药理干预，显著提升细胞治疗产品的稳定性和效能，这为炎症性肠病及其他自身免疫性疾病的治疗开辟了新途径。未来，结合抗原特异性iTregs的生成和精准递送策略，STAT6抑制有望成为Treg细胞疗法"工具箱"中的重要组成部分，为更多患者带来希望。