AhR/PPARγ 在环境相关剂量下介导由 16 种重点控制的多环芳烃（PAHs）暴露引起的肝脏脂质代谢紊乱

《Environmental Pollution》：AhR/PPARγ mediates hepatic lipid metabolism disorders induced by exposure to 16 priority-controlled PAHs at environment related doses

多环芳烃（PAHs）暴露通过激活AhR/PPARγ信号通路诱导大鼠肝脂代谢紊乱，表现为肝脂蓄积、氧化应激和炎症反应，且B[a]P对PPARγ结合能力最强。抑制PPARγ可逆转PAHs引起的脂代谢异常并降低AhR表达。基准剂量（BMD）为7.67×10?? μg/kg/day，远低于人类实际暴露水平。

　　本研究旨在探讨多环芳烃（PAHs）对肝脏代谢异常的影响及其潜在机制。通过长期暴露实验，研究者发现PAHs的暴露显著提升了大鼠肝脏中AhR和CYP1A1的表达水平，同时增加了促炎因子的浓度，但降低了肝脏中超氧化物歧化酶（SOD）的活性。这些变化表明，PAHs可能通过干扰肝脏的抗氧化能力，导致氧化应激和炎症反应的增强，从而引发肝脏代谢紊乱。此外，研究还发现，PAHs的暴露显著提升了与脂质合成和脂肪酸转运相关的蛋白质表达，包括PPARγ、SREBP1、DGAT1和CD36，同时抑制了与脂肪酸β-氧化相关的蛋白表达，如PPARα和CPT1A。这些结果表明，PAHs可能通过影响脂肪酸的代谢途径，导致肝脏中脂质的异常积累，从而诱发脂肪肝。

### 研究背景

PAHs是一类含有两个或更多苯环的持久性有机化合物，广泛存在于环境中。它们主要来源于不完全燃烧过程，如汽车尾气、工业排放、烟草烟雾和烹饪油烟等。人类主要通过吸入、摄入和皮肤接触等途径暴露于PAHs，其健康影响取决于暴露的浓度、时间、途径以及不同PAHs的毒性差异。美国环境保护署（EPA）已将16种PAHs列为优先控制物质，因其在环境中的浓度和毒性较高。通常情况下，PAHs在肝脏中被代谢，因此长期暴露可能导致肝脏的解毒能力超负荷。作为脂质代谢的核心器官，肝脏通过脂肪酸的摄取、氧化和合成等途径维持脂质平衡。然而，这些代谢网络的失衡可能导致肝细胞内脂质积累，血清中甘油三酯（TG）和总胆固醇（TC）升高，甚至引发心血管疾病。

AhR（芳香烃受体）在调节外源性物质（如PAHs）的代谢和毒性方面起着关键作用。它通过调控I相和II相代谢酶的转录，介导解毒过程。PPARγ（过氧化物酶体增殖物激活受体γ）是一种核转录因子，能够与RXR形成二聚体，并结合到PPAR反应元件（PPRE）的DNA结合域，从而影响脂质代谢和脂肪酸合成。此外，PPARγ在脂肪代谢、脂肪细胞分化、胰岛素作用、癌症预防、炎症和氧化应激等过程中发挥重要作用。脂质生成涉及多种因素和途径，其中PPARγ有助于维持脂质稳态并调控脂质合成相关蛋白的表达。

流行病学研究表明，PAHs暴露与脂质代谢障碍、非酒精性脂肪肝病（NAFLD）和肥胖风险增加存在关联。Shen等的研究表明，低剂量PAHs暴露可通过AhR信号通路引发氧化应激、炎症和脂质代谢紊乱，并增加哮喘风险。然而，PAHs引起的脂质代谢障碍的具体机制仍不明确。大多数先前研究集中在单一PAH的暴露上，尤其是苯并[a]芘（B[a]P），而现实世界中，人群往往同时暴露于多种具有不同特性和潜在毒性的PAHs。

为评估环境PAHs暴露对肝脏的影响并探索其潜在机制，研究团队对Sprague-Dawley（SD）大鼠进行了实验。实验中，大鼠被皮下注射16种优先控制的PAHs，持续90天，以研究PAHs混合暴露对脂质代谢的影响。基于文献回顾，PPARγ被选为影响脂质代谢的关键靶基因。随后，研究者进行了计算机模拟和体外拮抗剂干预实验，以验证其假设。

### 实验材料与方法

#### 动物暴露

本实验使用了8周龄的健康雄性SPF SD大鼠（许可证编号：SCXK(Yue) 2020-0054和SCXK(Yue) 2021-0041）。所有大鼠均来自南方医科大学实验动物中心。选择雄性大鼠是为了避免雌性周期和雌激素对实验结果的影响。所有动物实验均经华南师范大学动物伦理委员会批准（批准号：SCNU-SLS-2023-035）。大鼠在控制条件下饲养（温度25±2°C，湿度45±5%，12小时光照/黑暗周期），自由获取食物和水。在整个实验过程中，每周一、三、六记录大鼠体重。实验结束后，大鼠被处死以收集血浆和肝脏组织。肝脏样本立即用液氮冷冻，并在-80°C下保存以备进一步分析。

首先，40只大鼠被适应一周。然后在8周龄时，随机分为溶剂对照组（0.1% DMSO）、1×PAHs暴露组、10×PAHs暴露组和100×PAHs暴露组。16种优先控制的PAHs的浓度与之前的研究相同（Liu等，2024）。1×PAHs剂量基于中国普通人群中16种PAHs的中位浓度（见表S1），反映了PAHs的典型低剂量暴露水平。10×PAHs代表职业暴露水平。对于拮抗剂干预实验，40只SD大鼠被适应一周后，随机分为四组：溶剂对照组（0.1% DMSO）、10×PAHs暴露组、2-氯-5-硝基-N-苯基苯甲酰胺（GW9662，一种特异性PPARγ拮抗剂，1 mg/kg/day）组，以及10×PAHs+GW9662共处理组。由于PAHs的快速吸收，所有暴露和干预均采用皮下注射方式。PAHs暴露持续90天，GW9662（1 mg/kg/day）每周三、五、日给予三次（Baumann等，2022）。

#### H&E染色和脂滴染色

对大鼠肝脏组织进行了H&E染色和油红O染色。每组随机选取至少3只大鼠的肝脏组织进行组织学分析。对于H&E染色，肝脏组织在4%多聚甲醛中固定过夜，然后切成5 μm厚的切片。油红O染色则将组织嵌入OCT化合物过夜，切成8–10 μm厚的切片。所有切片使用荧光显微镜进行观察。通过Image J（Bio-Rad，美国）量化肝脏组织中空泡的百分比和脂滴面积。Image J的详细分析方法已在文献中描述（Deutsch等，2014；Li等，2024a）（文本S3）。

#### 大鼠肝脏的生化分析

从每组中随机选取至少3只大鼠的肝脏组织进行生化分析。肝脏组织被精确称重后，以1:9（w/v）的比例浸入0.9%冰冷生理盐水中，然后在冰上机械匀浆。3500 rpm离心10分钟（4°C）后，收集上清液进行生化分析。使用商业试剂盒（南京建成生物工程研究所，中国）测定肝脏代谢标志物的浓度，包括总甘油三酯（TG）、总胆固醇（T-CHO）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD），并按照制造商说明进行操作。

#### 蛋白质印迹（Western blotting）

Western blotting按照之前的方法进行（Meng等，2023）（文本S2）。使用兔源的初级抗体，包括GAPDH（1:1000，Cell Signaling Technology，美国，#2118S）、AhR（1:1000，Abcam，英国，#AB190797）、PPARγ（1:1000，Abcam，英国，#ab310324）、CPT1A（1:1000，Abcam，英国，#AB234111）、PPARα（1:1000，Abcam，英国，#AB314112）、p65（1:1000，Cell Signaling Technology，美国，#3033）、IL-6（1:1000，Abcam，英国，#AB259341）、IL-1（1:1000，Abcam，英国，#AB254360）、TNF-α（1:1000，Abcam，英国，#AB307164）、CD36（1:1000，Abcam，英国，#AB252922）、SREBP1（1:1000，Bioss，中国，#BS-1402R）和DGAT1（1:1000，Proteintech，美国，#82945-1-RR）。

#### 分子动力学（MD）模拟

人类PPARγ的晶体结构从RCSB蛋白质数据库（PDB ID：3ADX，分辨率：1.95 ?）中获取。PPARγ结构的质量通过ERRAT和PROCHECK模块在UCLA-DOE实验室SAVE服务器上进行评估（https://saves.mbi.ucla.edu/）。ERRAT图显示PPARγ结构的整体质量因子为95.113（图S3A），Ramachandran图显示其89.6%的残基位于最有利的区域（图S3B），表明该PPARγ结构适合进行分子模拟。萘（NAP）是一种分子量最小、环境丰度最高的双环PAH，被选为低环PAHs的潜在配体。芘（PYR）是一种具有强平面性的四环PAH，其代谢产物（如1-羟基芘）是PAHs暴露的常见生物标志物。苯并[a]芘（B[a]P）是一种分子量较大、环境丰度较低的五环PAH，也被选为研究PPARγ-PAHs相互作用的代表PAHs，因为它被国际癌症研究机构（IARC）列为第一类致癌物。因此，NAP、PYR和B[a]P被选为代表PAHs，以研究其与PPARγ的相互作用。此外，罗格列酮（ROSi），一种PPARγ激动剂，被用作阳性对照，以验证受体-配体复合物系统的可靠性并识别结合口袋中的关键残基。配体的分子结构见图S1。使用Autodock 4获得PPARγ-配体系统的最优初始构型。使用GROMACS软件（版本2019.6）对PPARγ和配体（即NAP、PYR、B[a]P和ROSi）进行200 ns的MD模拟，模拟条件为恒温、恒压和周期性边界条件。

#### 基准剂量（BMD）

选择连续数据类型进行BMD建模，并设置基线风险为10% BMD风险（Sand等，2002）。然后评估模型的拟合度并计算主要模型的权重。根据BMD/BMDL比值低于3和保守性原则，PPARα的mRNA水平是PAHs暴露最敏感的指标，其BMD为0.069 μg/kg/day。因此，PAHs的慢性参考剂量（RfD）为7.67×10?? μg/kg/day。由于本研究使用SD大鼠作为模型，因此在种间和种内外推时，不确定性系数（UF）均设置为10。实验周期为90天，因此BMD是从亚慢性研究外推至慢性研究，UF值为3。由于同时数据的不确定性通常取3，因此总体UF为900，低于美国RfD/RfC专家小组给出的最大UF值（即3000）。最终，使用以下公式计算非致癌效应的参考剂量（RfD）：RfD = BMDL / UF。

#### 统计分析

使用SPSS软件（SPSS，版本25.0，IBM，美国）进行统计分析。使用单因素方差分析（One-way ANOVA）比较四个组之间的差异。使用Levene检验测试方差齐性。方差齐时使用LSD检验，不齐时使用Dunnett's T3检验。独立样本t检验用于比较两组之间的差异。使用GraphPad Prism版本8（GraphPad Software，美国）进行数据可视化。数据以均值±标准误（SEM）表示。所有实验至少独立重复三次（n≥3）。显著性水平设为p<0.05（Liu等，2025）。

### 实验结果

#### 16种优先控制的PAHs混合暴露促进SD大鼠肝脏脂质积累

由于肝脏异常脂质积累可通过脂毒性加速脂肪肝的发病（El Bounkari等，2025；Li等，2024b），因此首先使用H&E染色评估肝脏组织损伤（图1A–D）。结果显示，对照组大鼠的肝脏组织呈现紧凑的叶状结构。相比之下，暴露于不同浓度PAHs的大鼠肝脏组织中可以明显观察到不同大小的脂质空泡和结构损伤（p<0.001），特别是在10×PAHs暴露组中，脂质空泡尤为明显（图1E）。此外，10×PAHs暴露还导致肝脏脂肪的积累（图4G），提供了PAHs暴露导致肝脏脂质代谢紊乱的直接证据。同时，PAHs暴露后，肝脏中的TG和TC水平显著升高，这与文献中报道的脂质代谢紊乱常伴随TG和TC水平升高一致（Zhao等，2023）。这表明长期暴露于PAHs会导致肝脏脂质异常积累。氧化应激和炎症指标的测定显示，PAHs暴露显著降低了SD大鼠肝脏中的SOD活性（p<0.05），但MDA含量没有显著变化。在10×和100×PAHs暴露组中，PPARγ、SREBP1、DGAT1和CD36的蛋白表达显著升高（p<0.05）。尽管1×PAHs暴露也略微降低了PPARγ和SREBP1的表达，但这些变化不显著。这些结果表明，环境PAHs暴露可以诱导肝细胞代谢紊乱并引发炎症反应。

#### 代表性PAHs与PPARγ的相互作用机制

鉴于体内实验显示环境PAHs暴露影响肝脏脂质合成和代谢，我们假设PPARγ可能在此过程中起关键作用。首先，通过分子对接预测了受体与配体的结合模式和稳定性。ERRAT和Ramachandran图的评估显示，开发的PPARγ模型得分高且适合进一步对接和模拟（图S3）。PPARγ与NAP、PYR、B[a]P和ROSi的结合能均小于?5 kcal/mol，其中B[a]P的结合能最低，表明其可能具有更强的结合亲和力。此外，B[a]P-PPARγ复合物的半径和溶剂可及表面积均小于其他复合物，表明其结合更为紧密。在B[a]P/ROSi-PPARγ复合物中，氨基酸残基的波动相似性较高，而NAP和PYR系统中的残基波动则更为剧烈，主要表现为反向运动，这可能表明B[a]P与PPARγ的结合模式与其他配体不同。通过主成分分析（PCA）（表S4）显示，PPARγ-NAP复合物的协方差矩阵值最大（12.707 nm2），而PPARγ-B[a]P复合物的协方差矩阵值最小（6.643 nm2）。B[a]P-PPARγ复合物在PC1和PC2空间中的轨迹投影更为集中，表明其与PPARγ的结合更为稳定。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPARγ。疏水残基（如异亮氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸和甲硫氨酸）可以与疏水PAHs形成强范德华力，增强结合。NAP与PPARγ疏水通道入口处的异亮氨酸341、亮氨酸255和精氨酸280相互作用，而PYR则通过与赖氨酸457、亮氨酸465、酪氨酸473和亮氨酸453相互作用与PPARγ表面结合。相比之下，B[a]P和ROSi通过疏水α-螺旋通道进入PPARγ的腔室，可能引发PPARγ的持续激活。因此，NAP-PPARγ复合物更容易解离。

在B[a]P-PPARγ复合物中，对吉布斯自由能做出负贡献的氨基酸残基数量最多，协方差矩阵值最小，轨迹在PC1和PC2空间中的投影更为集中，这证实了B[a]P与PPARγ结合的稳定性。这些结果表明，B[a]P可能是PAHs中对PPARγ介导毒性贡献最大的化合物。然而，我们无法确认除了B[a]P之外，其代谢产物如BPDE是否与PPARγ有更强的相互作用。因此，缺乏实验分子证据是本研究的一个局限。微尺度热泳（MST）可能为B[a]P与PPARγ的相互作用提供直接的分子证据（Nowak等，2024）。

此外，研究还探讨了配体结合后PPARγ结合口袋的二维和三维结构变化。这些PAHs主要通过非共价相互作用（如范德华力、π-π堆叠和π-烷基相互作用）与PPARγ的活性口袋中的氨基酸残基相互作用。这些不同的相互作用模式也影响了PAHs激活PPARγ的能力。与ROSi不同，PAHs主要通过疏水或非键相互作用与PPARγ结合。这解释了为什么ROSi能够强烈激活PPAR