外泌体 circ_0001583 通过 miR?647/CKAP2L 通路驱动胶质母细胞瘤进展：关键机制与潜在诊疗靶点

《Molecular Neurobiology》：Exosomal circ_0001583 Drives Glioblastoma Cell Advancement Through the miR-647/CKAP2L Pathway

为解决胶质母细胞瘤（GBM）诊疗困境，研究人员开展外泌体 circ_0001583 对 GBM 影响的研究。结果发现外泌体 circ_0001583 通过 miR?647/CKAP2L 通路促进 GBM 进展。该研究成果发表在《Molecular Neurobiology》上，为 GBM 的治疗提供了新的思路和潜在靶点。

　　

胶质母细胞瘤（Glioblastoma Multiforme，GBM）作为一种常见且恶性程度极高的原发性脑肿瘤，严重威胁人类健康。目前，GBM 的治疗手段主要包括手术、放疗和化疗，但患者的中位生存时间仅 15 个月，5 年生存率也仅有 6.8%。这主要是因为 GBM 具有很强的浸润性，容易复发且对药物耐药 。因此，寻找新的诊断和治疗策略迫在眉睫。

在这样的背景下，浙江省人民医院（杭州医学院附属人民医院）的研究人员开展了一项关于外泌体 circ_0001583 在 GBM 进展中作用的研究。该研究成果发表在《Molecular Neurobiology》上，为 GBM 的治疗提供了新的思路和潜在靶点。

研究人员主要运用了以下几种关键技术方法：首先，通过分析基因表达综合数据库（GEO）和临床样本，研究 circ_0001583 在 GBM 中的表达情况；其次，利用定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测基因表达水平；此外，还构建稳定转染细胞系，进行功能实验，如细胞增殖、侵袭和糖酵解实验；同时，运用生物信息学分析、RNA 下拉实验、荧光素酶报告实验等探究分子机制；最后，建立裸鼠异种移植模型进行体内实验。

下面来看具体的研究结果：

1. circ_0001583 在胶质母细胞瘤中的表达及临床意义：研究人员整合分析 GEO 数据集，发现 circ_0001583 在 GBM 组织和细胞系中显著上调。对 70 例 GBM 患者和 22 例正常脑组织样本的 qRT-PCR 分析进一步证实了这一点。Kaplan-Meier 生存分析显示，高表达 circ_0001583 的患者总体生存率较差。而且，circ_0001583 的高表达与 GBM 的高级别 WHO 分级和 MRI 检测到的坏死显著相关。

2. 抑制 circ_0001583 对 GBM 细胞的影响：研究人员构建了稳定敲低 circ_0001583 的细胞系，发现敲低 circ_0001583 后，GBM 细胞（LN229 和 U251）的增殖、侵袭能力受到抑制，糖酵解活动也明显降低，表现为葡萄糖消耗、乳酸产生和细胞 ATP 水平下降。

3. circ_0001583 过表达对 GBM 细胞的影响：在 A172 细胞中过表达 circ_0001583，结果显示细胞的增殖、侵袭能力增强，糖酵解活动增强，葡萄糖消耗、乳酸产生和细胞 ATP 水平均升高。

4. circ_0001583 作为 miR-647 海绵的作用机制：通过生物信息学分析和一系列实验，包括 RNA 下拉实验、荧光素酶报告实验和 RNA 免疫沉淀（RIP）实验，证实 circ_0001583 可作为 miR-647 的海绵，二者存在直接相互作用。在 GBM 组织中，miR-647 表达降低，且与 circ_0001583 的表达呈负相关。

5. miR-647 对 CKAP2L 表达的调节作用：研究发现细胞骨架相关蛋白 2 样（CKAP2L）是 miR-647 的靶基因。双荧光素酶报告实验证实了二者的直接结合。临床样本分析显示，GBM 组织中 CKAP2L 表达升高，且与 circ_0001583 的表达呈正相关，与 miR-647 的表达呈负相关。

6. circ_0001583 通过 miR-647/CKAP2L 通路调节 GBM 细胞功能：通过一系列挽救实验表明，circ_0001583 主要通过调节 miR-647/CKAP2L 通路来促进 GBM 细胞的增殖、侵袭和糖酵解。在敲低 circ_0001583 的细胞中，抑制 miR-647 或过表达 CKAP2L 能够部分恢复细胞的增殖、侵袭能力和糖酵解水平。

7. circ_0001583 沉默对 GBM 生长的体内影响：在裸鼠异种移植模型中，敲低 circ_0001583 显著抑制了肿瘤的生长，肿瘤体积和重量明显减小。同时，肿瘤组织中 miR-647 表达上调，细胞增殖标记物 Ki-67、靶蛋白 CKAP2L 以及关键糖酵解酶己糖激酶 2（HK2）和乳酸脱氢酶 A（LDHA）的表达均降低。

8. GBM 细胞外泌体 circ_0001583 对正常人类星形胶质细胞的影响：共培养实验表明，GBM 细胞来源的外泌体能够将 circ_0001583 转移到正常人类星形胶质细胞（NHAs）中，促进 NHAs 的增殖。外泌体 circ_0001583 的转移导致 NHAs 中 circ_0001583 水平升高，miR-647 表达降低，CKAP2L 水平升高。

综合上述研究结果，该研究明确了 circ_0001583 在 GBM 进展中的致癌作用。circ_0001583 作为竞争性内源性 RNA（ceRNA），通过吸附 miR-647，调节 CKAP2L 的表达，进而影响肿瘤细胞的增殖、侵袭和糖酵解。此外，GBM 细胞还可通过外泌体将 circ_0001583 转移到正常星形胶质细胞，促进其增殖，影响肿瘤微环境。该研究为 GBM 的诊断和治疗提供了新的潜在靶点和生物标志物，但外泌体 circ_0001583 在肿瘤与基质细胞通讯及疾病进展中的复杂作用仍需进一步研究。未来，检测患者血液中循环外泌体 circ_0001583 水平，对于评估其作为 GBM 液体活检生物标志物的潜力具有重要意义。