超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)同步检测疫苗中草甘膦及其代谢物AMPA残留的研究

为解决疫苗中草甘膦(GLYP)及其代谢物氨基甲基膦酸(AMPA)残留监测的技术难题，印度血清研究所团队开发了一种基于UPLC-MS/MS的灵敏检测方法。该方法线性范围广(2–50 ng/mL GLYP，2–100 ng/mL AMPA)，检测限低至0.5 ng/mL，成功应用于DTwP-HBV-Hib等复合疫苗基质分析，为疫苗安全性评估提供了重要技术支撑。

　　

在全球范围内广泛使用的除草剂草甘膦(GLYP)及其主要代谢物氨基甲基膦酸(AMPA)，近年来因其潜在的致癌性和基因毒性引发广泛关注。国际癌症研究机构(IARC)将GLYP列为2A类致癌物，而疫苗生产过程中可能通过动物源性原料（如牛血清、明胶）引入这些污染物。然而，现有检测技术面临三大挑战：GLYP/AMPA的高极性和无发色团特性使传统HPLC-UV检测困难；ELISA法存在抗体亲和力不足的问题；既往LC-MS方法未能同步检测AMPA。

印度血清研究所的Bharat Shinde团队在《Biologicals》发表研究，首次建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同步检测疫苗中GLYP和AMPA的方法。研究人员选取DTwP-HBV-Hib(白喉-破伤风-全细胞百日咳-乙肝-b型流感嗜血杆菌联合疫苗)、MMR(麻疹-腮腺炎-风疹三联疫苗)等典型疫苗基质，采用¹³C₂¹⁵N标记同位素内标，通过液液萃取前处理实现复杂基质的净化。

主要技术方法
研究采用Waters ACQUITY UPLC系统耦合三重四极杆质谱，以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱。方法验证严格遵循ICH指南，通过加标回收实验评估准确性(83–108%)和精密度(RSD≤14%)，建立2–50 ng/mL (GLYP)和2–100 ng/mL (AMPA)的线性范围(r²>0.997)，LOD达0.5 ng/mL。

结果与讨论
方法学验证：在PCV-10(肺炎球菌结合疫苗)等不同疫苗基质中，该方法成功克服离子抑制效应，回收率符合生物分析要求。同位素稀释技术有效校正了基质效应，MS/MS多反应监测模式(MRM)显著提升选择性。

实际样本检测：所有测试疫苗均未检出GLYP/AMPA残留，推测可能由于：①疫苗纯化工艺去除污染物；②原料供应商质量控制严格。但研究者强调，建立该监测方法对疫苗生产全过程监管仍具重要意义。

结论与意义
该研究填补了疫苗中AMPA同步检测的技术空白，其创新性体现在：①首次将UPLC-MS/MS应用于疫苗复杂基质中极性小分子检测；②方法灵敏度较既往报道提升4倍；③为WHO疫苗预认证提供新质控指标。虽然当前样本未检出残留，但方法可应用于原料筛查、生产工艺监控等场景，尤其对使用植物蛋白表达系统的重组疫苗更具价值。研究团队建议将该方法纳入疫苗企业质量控制体系，以应对日益严格的药品安全监管要求。