Aggregatibacter actinomycetemcomitans三种血清型外膜囊泡的蛋白质组学特征及其与中性粒细胞互作机制研究

本研究针对牙周病原体Aggregatibacter actinomycetemcomitans（Aa）不同血清型（a/b/c）外膜囊泡（OMVs）的致病差异，通过质谱技术和中性粒细胞感染实验，首次揭示OMVs携带53种毒力因子且存在血清型特异性丰度差异，其中CRISPR蛋白的独特分布和OMVs诱导中性粒细胞外诱捕网（NETs）的机制，为理解牙周炎和全身性疾病关联提供新视角。

　　

牙周病原体Aggregatibacter actinomycetemcomitans（Aa）与侵袭性牙周炎及全身性疾病（如类风湿性关节炎、阿尔茨海默病）密切相关，其七种血清型中a/b/c型全球流行且毒力差异显著。然而，不同血清型Aa分泌的外膜囊泡（OMVs）如何通过蛋白质载量差异影响宿主免疫应答尚不明确。荷兰格罗宁根大学医学中心的研究团队在《International Journal of Medical Microbiology》发表论文，首次系统比较了三种血清型Aa-OMVs的生物学特性及其与中性粒细胞的互作机制。

研究采用超速离心结合OptiPrep密度梯度法纯化OMVs，通过动态光散射（DLS）和透射电镜（TEM）表征囊泡形态，利用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）定量蛋白质组学分析，结合健康志愿者来源的中性粒细胞感染实验和共聚焦显微镜三维成像技术，揭示了OMVs的致病特征。

3.1 Aa-OMVs的物理特性
OMVs直径范围为21-396 nm，其中血清型b的30R isolate囊泡最小（峰值61 nm），而血清型c的2R isolate最大（峰值116 nm）。蛋白质/LPS比值显示血清型a的14R isolate载量最低，7R isolate最高，提示血清型特异性膜组成差异。

3.2 蛋白质组学特征
共鉴定276种OMVs相关蛋白，其中53种为已知毒力因子。核心蛋白（53种）主要定位周质（40%）和外膜（36%），而可变蛋白（223种）中63%为胞质蛋白。血清型a OMVs特异性携带CRISPR相关蛋白，血清型b则富含LtxA（白细胞毒素）、fHbp（补体调控蛋白）和铁摄取蛋白。

3.3 中性粒细胞互作机制
除血清型a的25R isolate外，绝大多数OMVs（如血清型b的30R）主要粘附于中性粒细胞表面而非内化。OMVs可诱导中性粒细胞外诱捕网（NETs）形成，其中14R isolate（含CRISPR蛋白）诱发的NETs最显著。共定位实验证实NETs能捕获OMVs，形成"远程防御"机制。

该研究首次阐明Aa不同血清型OMVs通过差异蛋白质载量调控宿主免疫应答：血清型b的OMVs凭借高丰度LtxA和OmpW（抗吞噬蛋白）展现更强毒力；血清型a的CRISPR蛋白可能通过未知机制增强NETosis；而OMVs与NETs的相互捕获现象，为解释牙周病原体免疫逃逸提供了新思路。这些发现不仅深化了对牙周炎-全身性疾病关联的理解，也为开发靶向OMVs的干预策略奠定了理论基础。