多重免疫表型分析用于评估先天免疫系统的激活情况，可检测治疗药物中免疫调节核酸杂质对单细胞反应的影响

《The AAPS Journal》：Multiplexed Immunophenotyping for Innate Activation Assessment Detects Single-Cell Responses to Immunomodulatory Nucleic Acid Impurities in Therapeutics

天然免疫反应调节杂质（IIRMI）的检测新技术MIIAA通过光谱流式细胞术实现单细胞免疫表型分析，可评估治疗性寡核苷酸或单抗中的免疫原性风险。

摘要

具有佐剂潜力的先天免疫反应调节杂质（IIRMI）已成为蛋白质、肽和寡核苷酸治疗药物免疫原性风险评估的重要因素，尤其是在那些几乎没有或完全没有临床研究的后续产品中。为了评估杂质差异对特定细胞类型的影响，我们开发了一种新的IIRMI检测方法，称为“多重免疫表型分析用于先天激活评估”（MIIAA），该方法利用光谱流式细胞术来捕获药物产品和潜在杂质对单细胞的反应。该技术引入了一种新的活细胞荧光条形码平台，能够通过单一荧光抗体混合物实现样本的多路复用，这种抗体混合物同时包含用于识别细胞身份和激活状态的标记物，并由Cytek Aurora五激光系统进行检测。通过条形码染料的正向和负向门控，样本可以数字化地重新分配到其原始的测试条件下。利用UMAP对表面标记物进行降维处理，然后通过细胞特异性标记物进行进一步的分选。在本研究中，我们使用微量的TLR3、7/8和9激动剂（Poly(I:C)、R848和CpG ODN）来表征B细胞、单核细胞、cDC和pDC中的特异性反应。重要的是，MIIAA能够在治疗性寡核苷酸或单克隆抗体的存在下，高灵敏度地捕获细胞对核酸杂质的单细胞反应。总体而言，MIIAA提供了一种强大的免疫表型分析工具，可用于表征药物产品和潜在免疫调节杂质对单细胞的反应，这可能在药物研发过程中有助于评估治疗药物对特定免疫细胞的影响，并比较参考产品和后续产品的免疫原性或免疫调节风险。

图形摘要