基于蛋白质组学的LC–MS/MS方法发现并绝对定量水溶性特征肽，用于山羊角的质量评估

《Phytochemical Analysis》：Discovery and Absolute Quantification of Water-Soluble Signature Peptides via LC–MS/MS Based on Proteomics for Quality Evaluation of Goat Horn

山羊角作为濒危萨加角的传统替代品，本研究通过超声波辅助提取结合质谱分析，发现13个特征肽段可区分5种牛科动物角，并建立7个特征肽段的绝对定量方法。优化的质量控制标记为GHpep7和GHpep11，具有高丰度和低批次变异（RSD<15%）。该方法显著缩短样本制备时间至6小时以内，为山羊角质量控制提供新范式。

摘要

引言

山羊角是传统医学中替代濒危赛加羚羊角的主要材料。现有的质量控制（QC）方法缺乏特异性，无法有效检测出于经济目的而混入的其他牛科动物角的情况。

研究目的

本研究旨在发现具有物种特异性的肽，并开发一种基于质谱技术的可靠方法，以鉴定山羊角并量化其特征肽。

方法

采用无标记蛋白质组学策略，对五种牛科动物的胰蛋白酶消化产物进行了分析：山羊角（来自Capra hircus）、羊角（Ovis aries）、水牛角（Bubalus bubalis）、牛角（Bos taurus）和牦牛角（Bos grunniens），使用nanoLC-Orbitrap质谱仪筛选特征肽。同时开发了一种新型超声辅助同步提取-酶解（UASEE）方法用于样品制备。在UHPLC–MS/MS平台上建立了七种山羊角肽的绝对定量方法。共分析了22批山羊角样品。

结果

鉴定出13种能够明确区分五种牛科动物的特征肽。UASEE方法将样品制备时间缩短至24–6小时内。定量方法表现出良好的线性（r≥0.997）、精度（RSD<8.2%）、重复性（RSD<5.8%）、稳定性（RSD<9.2%）和准确性（回收率84.6%–114.2%，RSD<13.9%）。根据定量结果，GHpep 7（平均含量0.224 mg/g）和GHpep 11（平均含量0.137 mg/g）被选为最佳质量控制标志物，因为它们的丰度高且批次间变异性小（RSD<15%）。

结论

本研究利用UASEE和LC–MS/MS技术建立了山羊角特征肽的发现和绝对定量平台，有效解决了掺假问题，并为山羊角的质量控制标准奠定了基础。

利益冲突

作者声明不存在利益冲突。

数据可用性声明

支持本研究结果的数据可应合理要求向通讯作者索取。