Povorcitinib（INCB054707）作为高选择性口服JAK1抑制剂的比较药理学特征：基于酶学、激酶组、细胞因子报告基因及人全血STAT磷酸化的体外选择性评价

《Dermatology and Therapy》：Comparative Pharmacologic Characterization of Povorcitinib (INCB054707) as a Highly Selective Oral JAK1 Inhibitor

　　

引言：Janus激酶/信号转导及转录激活因子（JAK-STAT）通路介导多种对炎症和免疫调节关键的细胞因子和生长因子的信号转导。Povorcitinib（INCB054707）是一种口服JAK1抑制剂，旨在实现对JAK2的高选择性并尽量减少脱靶血液学效应。研究人员全面评估了povorcitinib相对于JAK抑制剂upadacitinib、abrocitinib、baricitinib和tofacitinib的体外选择性和效力。方法：采用酶学测定、覆盖370种激酶的全激酶组谱分析、细胞因子报告基因测定、人全血STAT磷酸化测定和细胞活力研究对povorcitinib及对照化合物进行表征。结果：Povorcitinib表现出强效、选择性的JAK1抑制，对JAK2、JAK3和酪氨酸激酶2（TYK2）活性极低，在多数测定中显示对JAK2≥50倍选择性，超过其他JAK抑制剂。激酶组筛选证实极小的脱靶活性。在基于细胞的测定中，povorcitinib选择性抑制白细胞介素（IL）-6–和IL-2–介导的JAK1信号，对血小板生成素（TPO）介导的JAK2信号抑制极小，在细胞因子报告基因测定中达到高达52倍功能性JAK1选择性，并在人全血中达到大于10倍选择性。相反，其他选择性JAK1抑制剂如upadacitinib在全血测定中显示近乎等效的JAK1/JAK2抑制。Povorcitinib在HEK293、HEPG2、HUVEC和HLF细胞中浓度> 5000 nM时未显示细胞毒性，这些细胞不依赖JAK。在正交测定中，povorcitinib在评估的JAK抑制剂中一致表现出最高的JAK1选择性。结论：这些数据，连同其有利的药代动力学特征和新兴临床安全性特征，突出povorcitinib作为高度选择性下一代JAK1抑制剂的潜力。

论文解读文章：Janus激酶（JAK）整合关键细胞因子和生长因子信号，JAK1是炎症性疾病高度相关靶点，而JAK2抑制与非期望的血细胞减少相关。JAK-STAT通路介导多种参与炎症和免疫调节的细胞因子与生长因子信号。在四种JAK中，JAK1可被I型和II型细胞因子激活，包括I型干扰素（IFN）、IFN-γ、白细胞介素（IL）-2、IL-4、IL-6、IL-13以及胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）等。系统性JAK1/JAK2抑制剂在JAK2突变所致骨髓增殖性肿瘤中有效，但在非恶性造血干/祖细胞中抑制JAK2与不良血细胞减少相关。第一代系统性JAK抑制剂如tofacitinib和baricitinib靶向多种JAK包括JAK2，在类风湿关节炎和溃疡性结肠炎等自身免疫疾病治疗中取得进展，但可见贫血等不良事件。在心血管风险因素富集的类风湿关节炎患者大型安全性试验中，tofacitinib相较肿瘤坏死因子（TNF）抑制剂显示更高机会性感染、主要不良心血管事件、恶性肿瘤、静脉血栓和全因死亡。这些挑战推动开发更选择性抑制JAK1的upadacitinib和abrocitinib，但较高剂量仍抑制JAK2，导致剂量限制毒性。Povorcitinib（INCB054707）是新一代口服JAK1抑制剂，对JAK2有超过50倍选择性，健康志愿者平均半衰期35–40 h，但患者人群药代动力学（PK）参数可能不同；临床试验在化脓性汗腺炎（HS）和白癜风显示疗效，两适应症有2期数据，HS有3期数据，实验室异常如贫血极少。研究人员比较povorcitinib与已获批JAK抑制剂upadacitinib、abrocitinib、baricitinib和tofacitinib的临床前特征，并在相同测定条件下进行稳健体外表征，以应对不同JAK抑制剂公开数据因实验条件差异导致的内在变异。

关键方法概括：采用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）激酶活性测定和PhosphoSens?技术测定JAK1、JAK2、JAK3、TYK2抑制活性；在370种野生型激酶panel中进行HotSpot?放射性激酶活性谱分析；使用表达IL-2受体（JAK1/JAK3）、TPO受体（JAK2）和IFN-α受体（JAK1/TYK2）的HEK Blue?报告细胞进行细胞因子报告基因检测；在人全血中通过Meso Scale Discovery（MSD?）检测IL-6/TPO诱导的pSTAT3，并通过流式细胞术检测IL-2诱导的CD3⁺ T细胞pSTAT5和TPO诱导的CD61⁺血小板pSTAT3；用CellTiter-Glo?评估HEK293、HEPG2、人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、人肺成纤维细胞（HLF）细胞活力。人全血来自健康供者（BioIVT）；临床最大血浆浓度（C_max）参考来自临床试验或美国食品药品监督管理局（FDA）批准处方信息。因无动物模型，无需伦理审批。

结果部分：JAK抑制剂的生化表征中，通过酶学活性测定（1 mM ATP）发现，povorcitinib对JAK1的IC₅₀为16 nM，对JAK2为622 nM，JAK1相对JAK2选择性为39倍，为评估化合物中最高；upadacitinib为22倍，abrocitinib为18倍，baricitinib为1.2倍，tofacitinib为2.5倍。Povorcitinib对JAK3选择性>313倍，对TYK2选择性43倍；对照化合物的JAK1相对JAK3和TYK2选择性范围分别为0.6–381倍和14–431倍。通过PhosphoSens?平台在1 mM ATP下进一步确认，povorcitinib的JAK1相对JAK2选择性为50倍，upadacitinib为9.0倍。生化表征：激酶组谱分析中，通过370种野生型激酶panel发现，所有化合物在JAK家族外活性有限；povorcitinib对JAK1的IC₅₀为6.2 nM，对JAK2为360 nM，对TYK2为141 nM，在亚微摩尔浓度对非JAK激酶无可检测脱靶抑制。tofacitinib和baricitinib显示更广泛谱，抑制PKN1、PKCγ、ROCK2和STK38等脱靶激酶。细胞报告基因测定中JAK抑制剂活性谱中，通过IL-2（JAK1/JAK3）、TPO（JAK2）和IFN-α/β（JAK1/TYK2）报告细胞发现，povorcitinib的JAK1相对JAK2选择性最高，为52倍；upadacitinib为15倍，abrocitinib为33倍，baricitinib为5.2倍，tofacitinib为14倍。Povorcitinib对TYK2选择性为12.5倍，对照化合物JAK1相对TYK2选择性为8.1–25.8倍。MSD测定人全血中IL-6诱导的pSTAT3和TPO诱导的pSTAT3抑制中，通过全血MSD测定发现，povorcitinib对JAK1和JAK2的IC₅₀分别为623 nM和>10,000 nM，JAK1选择性>16倍；upadacitinib为1.6倍，abrocitinib为>8倍，baricitinib为0.4倍，tofacitinib为0.9倍。流式细胞术测定人全血中IL-2诱导的pSTAT5和TPO诱导的pSTAT3抑制中，通过流式细胞术检测CD3⁺ T细胞pSTAT5和CD61⁺血小板pSTAT3发现，povorcitinib对JAK1/JAK3和JAK2/JAK2的IC₅₀分别为762 nM和7865 nM，JAK1选择性为10.3倍；upadacitinib为1.0倍，baricitinib为0.4倍，tofacitinib为4.2倍，abrocitinib为16.3倍。细胞活力测定中，通过HEK293、HEPG2、HLF和HUVEC细胞3天处理发现，povorcitinib对HLF和HUVEC的IC₅₀>5000 nM，对HEK293和HEPG2的IC₅₀>20,000 nM，显示无相关脱靶效应。JAK1/JAK2选择性总结显示，跨正交测定povorcitinib一致表现出最高JAK1选择性。

讨论部分总结：靶向JAK通路在自身免疫和炎症疾病中显示临床效用，口服小分子具有便利性，但JAK抑制剂安全性受到关注；tofacitinib大型安全性试验显示相较TNF抑制剂更高的机会性感染、主要不良心血管事件、恶性肿瘤、静脉血栓和全因死亡，而观察性研究未确认部分安全信号。对特定亚型选择性更高的下一代JAK抑制剂可能提供更优获益-风险比，但需在良好对照临床研究中评价。改善选择性可能通过保留相关JAK2抑制减少贫血和血细胞减少等血液学异常。比较不同JAK抑制剂公开数据的一个明确挑战是测定条件差异导致的内在变异；本研究在相同测定条件下进行稳健体外表征。跨酶活性、细胞信号、全血细胞因子反应和激酶组谱等正交测定，povorcitinib持续显示强效选择性JAK1抑制，对JAK2、JAK3和TYK2活性极低。酶活性测定中JAK1/JAK2 IC₅₀比值范围为39–58倍，优于所有其他测试化合物。对照化合物谱与已发表报告一致：第一代tofacitinib和baricitinib在JAK1/JAK2间选择性有限，upadacitinib和abrocitinib显示更大但测定依赖性选择性。Povorcitinib在细胞测定和全血测定中维持优越选择性，全血中显著抑制IL-6介导JAK1激活，对TPO介导JAK2激活影响极小。全血测定几何标准差因子为1–2.9，提示供者间细胞因子反应变异。UPADACITINIB在全血测定中显示几乎等效抑制JAK1和JAK2信号，类似非选择性JAK抑制剂。TPO MSD测定中abrocitinib、baricitinib和tofacitinib重复数据有限，因此这些结果被视为探索性并支持而非单独决定整体选择性评估。虽然研究强调JAK1/JAK2选择性，但JAK3和TYK2选择性也可能有临床意义；povorcitinib对JAK3和TYK2活性极低。细胞活力数据显示povorcitinib在最高测试浓度对非靶细胞无细胞毒性。本研究聚焦体外药理学特征，未设计评估临床疗效或安全性；比较临床C_max与全血MSD结果显示所有化合物在各自C_max下达到接近IC₅₀的JAK1抑制水平。C_max下估计JAK1抑制约为povorcitinib IC₆₆、upadacitinib IC₇₀、baricitinib IC₅₀、abrocitinib IC₇₈、tofacitinib IC₄₄。C_max下IC值需结合PK特征如峰谷和高于IC₅₀时间等参数，为未来工作。已发表povorcitinib在HS和白癜风的2期数据及HS 3期数据表明其疗效和极少实验室异常如贫血，支持其高选择性。研究局限包括测试浓度用于比较药理学分析而非直接模拟治疗暴露，测定依赖性变异、健康供者全血反应、部分对照化合物重复有限以及短期活力模型可能限制向临床外推。

结论翻译：综合考虑关于选择性、激酶组谱和效力的全部数据，研究人员提出povorcitinib表现出差异化JAK1抑制剂的特征，具有效力和选择性的最佳平衡。结合有利的药代动力学特征和迄今为止临床试验中低不良事件频率，越来越多证据表明povorcitinib是一种高选择性JAK1抑制剂。这些发现支持对povorcitinib继续开展临床评价。