《Parasitology Research》：Endoparasites of the Imperial Cormorant (Leucocarbo atriceps) in the Falkland Islands: investigation of secondary hosts and detection methods
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本研究针对福克兰群岛帝企鹅内寄生虫的传播机制展开调查。研究人员通过分析帝企鹅的食团，结合形态学和分子鉴定方法，首次在该地区系统性地检测了其内寄生虫的组成，并发现鳐鳍鱼类可能是Contracaecum的重要副宿主。同时，利用SAF技术在食团中首次检测到异形科吸虫卵，为理解寄生虫在海洋食物网中的传播提供了新数据，并对海洋生态健康监测具有重要参考价值。
帝企鹅是一种生活于南美洲南部沿海及福克兰群岛的食鱼性海鸟，作为海洋生态系统的顶级捕食者，它们的健康状况是评估海洋环境变化的重要“哨兵”。然而，要理解海鸟的寄生虫感染机制及其对健康的影响，研究人员面临着一个挑战：许多寄生虫（特别是蠕虫）的生命周期复杂，涉及多种中间宿主和副宿主。尤其在福克兰群岛，此前对帝企鹅的寄生虫群落知之甚少，缺乏对其内寄生虫种类、感染途径以及寄生虫与食物之间关联的系统性研究。为了填补这一知识空白，探究寄生虫在帝企鹅和其猎物之间的传播链条，并为该地区的海鸟生态健康评估提供基线数据，一个研究团队开展了一项针对福克兰群岛新岛上帝企鹅的食团分析工作。这项研究近期发表在期刊《Parasitology Research》上。
为了完成这项研究，作者主要采用了几个关键技术方法。首先，是样本收集与饮食分析：研究团队在2020年和2022年的南半球夏季，从福克兰群岛新岛的一个帝企鹅繁殖地，以非侵入性方式采集了82个完整的食团。在实验室中，通过解剖食团获取硬质残余物（如耳石、喙骨），并利用多种鉴定指南和专家意见，确定了帝企鹅的猎物组成。其次，是寄生虫的检测与鉴定：这包含两种主要方法。一是形态学与分子鉴定，在食团解剖过程中发现并保存的寄生虫幼虫，通过显微镜拍照、测量进行形态学初步鉴定，并提取DNA，通过PCR扩增线粒体细胞色素c氧化酶亚基I（COI）和内部转录间隔区（ITS）的基因片段，利用Sanger测序和GenBank比对进行分子物种鉴定。二是SAF（醋酸钠-甲醛）技术，这是一种常用于粪便样本的寄生虫卵检测方法，本研究将其首次应用于食团剩余物质，通过离心、过滤和显微镜检，检测内寄生虫的包囊和虫卵。最后，是数据分析：通过计算猎物出现频率、寄生虫流行率和平均感染强度，并利用对应分析（Correspondence Analysis）和卡方检验（Chi-squared tests）来探究寄生虫与特定猎物种类之间的关联。
饮食分析结果
通过对82个食团中硬质残骸的分析，研究人员明确了帝企鹅在福克兰群岛的饮食结构。结果表明，其主要食物包括鱼类、甲壳类、多毛类和头足类，其中鱼类是最主要的猎物。在鱼类中，以Patagonotothen属的鳐鳍鱼（ray-thinned fish）最为常见。
寄生虫检测结果
研究人员运用了形态学、分子鉴定和SAF技术三种方法来检测食团中的内寄生虫。
- 1.
通过形态学和分子鉴定发现的幼虫：在食团中发现的寄生虫幼虫绝大多数为线虫，属于两个科。最主要的是异尖科（Anisakidae），包括Contracaecum、Anisakis 和Pseudoterranova三个属，其中Contracaecum的流行率最高。通过分子鉴定，成功区分了Contracaecum chubutensis、C. osculatum、Anisakis simplex、A. pegreffii、Pseudoterranova decipiens 和 P. cattani等物种。此外，还鉴定出属于Hysterothylacium aduncum（泡翼科 Raphidascarididae）的幼虫，但流行率较低。
- 2.
通过SAF技术发现的寄生虫卵：SAF方法在食团残余物中成功检测出了寄生虫卵。其中，检测到了Contracaecum的虫卵，但未发现其他异尖科线虫的虫卵。更重要的是，SAF技术首次在自由生活的帝企鹅中检测到了异形科（Heterophyidae）吸虫的虫卵，这是一种鱼源性吸虫。
- 3.
检测方法比较：比较通过食团解剖（发现幼虫）和SAF技术（发现虫卵）两种方法检测寄生虫的结果，发现它们之间存在一定的差异，总体一致性评价为“一般”（fair, Cohen’s kappa = 0.31）。对于Contracaecum，两种方法的一致性为“中等”（moderate, kappa = 0.45）。这表明结合多种方法能更全面地评估寄生虫感染状况。
寄生虫-猎物关联分析结果
为了探究帝企鹅体内的寄生虫是否来源于其摄食的猎物，研究人员进行了寄生虫与猎物的关联性分析。对应分析（Correspondence Analysis）显示，三种异尖科线虫（Contracaecum、Anisakis、Pseudoterranova）以及异形科吸虫（Heterophyidae）的分布，在视觉上与鳐鳍鱼（Patagonotothen sp.）的分布相关联。进一步的统计检验表明，其中只有Contracaecum与鳐鳍鱼之间的关联具有统计学显著性（X2= 5.9, p = 0.015）。Hysterothylacium则未与任何特定猎物表现出关联。
研究结论与讨论
本研究的核心结论是明确了福克兰群岛帝企鹅的内寄生虫群落，并初步揭示了其可能的传播途径。首先，该研究确认了帝企鹅饮食以鱼类为主，其中鳐鳍鱼占重要地位。其次，研究首次系统性地报告了该地区帝企鹅的寄生虫情况，证实了异尖科线虫（尤其是Contracaecum）是最主要的内寄生虫，并且首次在自由生活的帝企鹅中发现了异形科吸虫（Heterophyidae），扩大了该寄生虫的宿主记录。
这项研究最重要的意义在于其对寄生虫传播链条的初步揭示。通过发现Contracaecum与鳐鳍鱼之间存在显著关联，并结合鳐鳍鱼已知的饮食（包含桡足类等小型甲壳动物，而桡足类被认为是Contracaecum的中间宿主），研究人员推断鳐鳍鱼很可能在帝企鹅感染Contracaecum的过程中扮演了“副宿主”（paratenic host）的角色。即，幼虫在鳐鳍鱼体内积累但不发育，帝企鹅通过捕食鳐鳍鱼而感染。这为理解海洋环境中复杂寄生虫生命周期的具体环节提供了现场证据。
在方法学上，本研究验证了将传统用于粪便样本的SAF技术应用于海鸟食团残余物以检测寄生虫卵的可行性。虽然SAF与食团解剖在结果上不完全一致，但其作为一种补充性、非侵入性的检测工具，为海鸟寄生虫学研究提供了新的选择，尤其适用于难以获取新鲜粪便或尸检样本的情况。
最后，该研究也指出了未来需要进一步探索的方向。例如，异形科吸虫在帝企鹅中发现的宿主-寄生虫关系尚不明确，其在福克兰群岛海洋食物网中的中间宿主有待查明。此外，需要开展对当地桡足类、鱼类等潜在中间/副宿主的针对性调查，以更完整地描绘出Contracaecum等寄生虫的生命周期图谱，并评估寄生虫负荷对帝企鹅种群健康的潜在影响。总之，这项研究为福克兰群岛及更广阔的南大洋海洋生态系统的健康监测和寄生虫生态学研究奠定了重要的基础。
