中国东部青岛市白纹伊蚊(Aedes albopictus)中发现与猫栉首蚤立克次体(Rickettsia felis)亲缘关系相近的一株立克次体(Rickettsia)新亚种

《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》：A novel Rickettsia subspecies closely related to Rickettsia felis in Aedes albopictus from Qingdao City, Eastern China

　　

摘要：蚊虫通常被视为主播多种人畜共患病的主要媒介，能够传播各类疾病并造成显著的公共卫生负担。本研究于中国东部山东省青岛市共采集232只白纹伊蚊(Aedes albopictus)，研究人员认为发现了猫栉首蚤立克次体(Rickettsia felis，一种受全球关注的新现人类病原体，主要由蚤、蚊及书虱携带维持)的一个新亚种。遗传分析显示，该菌株的htrA基因与Rickettsia felis的最高核苷酸同源性为99.29%；其16S序列与OnF11株Rickettsia sp.的16S rRNA基因核苷酸相似度为100%；gltA序列与Candidatus Rickettsia senegalensis分离株及Candidatus Rickettsia senegalensis strain PU01-02的同源性均为98.77%；groEL序列与Candidatus Rickettsia yingkouensis克隆YK50的同源性为99.42%；ompB序列与Rickettsia hoogstraalii的同源性为99.42%。基于16S、gltA、groEL、htrA及ompB基因串联核苷酸序列构建的系统发育树显示，该菌株与R. felis亲缘关系密切，研究人员将其命名为"Candidatus Rickettsia felis subsp. laoshanensis"。其对人类及动物宿主的致病潜能尚待全面确定。

论文解读：

本文发表于《Frontiers in Cellular and Infection Microbiology》。研究背景方面，全球超过80%人口面临虫媒传染病威胁，其中蚊媒疾病负担最重。白纹伊蚊(Aedes albopictus)是登革热、基孔肯雅热及寨卡病毒等重要虫媒病毒的主要媒介，在中国复杂生态与快速城市化背景下其分布与生态学受到广泛关注。立克次体(Rickettsia spp.)为专性细胞内寄生的革兰氏阴性菌，传统上由蜱、螨、蚤、虱维持并传播引起立克次体病(rickettsioses)，近年来越来越多研究报道蚊虫亦可携带Rickettsia felis（猫蚤立克次体，引起猫蚤斑疹伤寒/spot-ted fever）及Rickettsia bellii等。然而中国东部地区尤其是青岛关于蚊源立克次体的本底调查较少，且是否存在与R. felis亲缘密切的新变异株尚不清楚，因此研究人员开展本次调查以了解青岛地区蚊媒中立克次体的感染状况及遗传特征。

关键技术方法概述：研究人员于2025年8月在中国山东青岛市城阳、市北、市南、平度及崂山5个区采用双层帐诱法与人诱法采集蚊类标本，经形态学结合细胞色素氧化酶亚基I(COI)基因测序鉴定种类后按采样点混合成池；蚊样经PBS冲洗、加高糖DMEM培养基与金属珠匀浆，取上清与裂解液混合，使用全自动核酸提取仪提取DNA并-80℃保存。以立克次体16S rRNA基因保守区半巢式PCR进行初筛，阳性样本进一步扩增16S rRNA（长片段约1200 bp）、柠檬酸合成酶基因(gltA)、60 kDa伴蛋白基因(groEL)、17 kDa抗原基因(htrA)及外膜蛋白B基因(ompB)，引物设计与退火温度见附表；PCR分两区操作防污染，产物经1%琼脂糖凝胶电泳后送Sanger测序。序列用Chromas查看、BLAST比对，MEGA 7分别比对各基因后串联构建多位点串联数据集，采用最大似然法(Maximum Likelihood)建系统发育树，自举值(bootstrap)1000次重复，>60%显示。所得序列已提交GenBank（登录号PX704800, PX797672, PX698602–PX698604）。

研究结果如下：

3.1 Mosquito species（蚊种鉴定）：研究人员共采集232只蚊虫，经形态学与COI基因测序确认全部为白纹伊蚊(Aedes albopictus)，依采样地分为26个池。其中1个池立克次体检测阳性（含8只蚊），池阳性率为各基因均为3.85%（1/26），蚊虫最低感染率(minimum infection rate, MIR)为0.43%，表明当地Aedes albopictus中存在低水平Rickettsia感染。

3.2 Phylogenetic analysis of Rickettsia（立克次体系统发育分析）：初筛16S基因半巢式PCR检出1池阳性后，成功获得该株较长16S rRNA(1200 bp)、gltA、groEL、htrA及ompB基因部分序列。序列比对显示：htrA与Rickettsia felis最高相似度99.29%；16S rRNA与Rickettsia sp. OnF11株16S rRNA基因100%相同；gltA与Candidatus Rickettsia senegalensis分离株及PU01-02株相似度98.77%；groEL与Candidatus Rickettsia yingkouensis克隆YK50相似度99.42%；ompB与Rickettsia hoogstraalii相似度99.42%。基于上述五基因串联序列构建的最大似然系统发育树显示，该分离株形成一支独立分支，与已知人类致病菌Rickettsia felis聚在同一大支且亲缘密切。参照Fournier等(2003)立克次体新亚种分子鉴定标准（同一物种不同株间16S rRNA≥99.8%、gltA<98.9%、ompB<98.7%等可判定为亚种），研究人员提出其为Rickettsia felis的一个新亚种，因仅在分子水平检出未获纯培养，暂命名为"Candidatus Rickettsia felis subsp. laoshanensis"（以首次发现地崂山命名）。

讨论部分总结：本研究在青岛白纹伊蚊中鉴定出一株与Rickettsia felis高度相近的候选新亚种Candidatus Rickettsia felis subsp. laoshanensis。Rickettsia felis自1990年于猫蚤(Ctenocephalides felis)中电镜观察到，1996年定名，现已知可由蚤、蚊（如致倦库蚊Culex quinquefasciatus、埃及伊蚊Aedes aegypti等）及书虱携带，并在多国报道。中国江苏首次报道人感染R. felis，辽宁营口曾报道蚊源Candidatus Rickettsia yingkouensis。本株比Candidatus R. yingkouensis在系统树上更接近典型R. felis。白纹伊蚊具强攻击性与广分布特性，可能促进该立克次体与人类及其他脊椎动物接触；但其究为蚊体内共生菌抑或具动物／人致病潜力尚不明，因htrA等与R. felis高度相似故需进一步研究其致病性。局限包括单时点单地区采样、样本量偏小、仅基于部分基因片段未做全基因组及功能／致病性评价。未来应扩大多点多时段采样验证流行率。综上，研究结论为：研究人员于中国山东青岛白纹伊蚊(Aedes albopictus)中检测到一株与Rickettsia felis亲缘密切的立克次体新候选亚种，命名为"Candidatus Rickettsia felis subsp. laoshanensis"，多位点序列分析及系统发育树支持其与R. felis近缘但可区分，最低感染率0.43%，其人类及动物致病性有待进一步阐明，该结果为当地立克次体监测提供了基线数据。