黄连温胆汤通过抑制NF-κB/HDAC1/SREBP-1c轴来减轻肝脏炎症和脂肪生成

《Journal of Ethnopharmacology》：Huanglian Wendan Decoction attenuates hepatic inflammation and lipogenesis via inhibition of the NF-κB/HDAC1/SREBP-1c axis

温帆|周芳宇|宋庆亮|刘良浩|黄思远|潘金月|张月静|杨琴河|潘茂兴|张宇佩
中国广州暨南大学中医药学院

**摘要**
**民族药理学意义**
代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）以肝脏脂肪变性为特征，同时伴有持续性炎症和早期纤维化。在中医理论中，黄连温胆汤用于治疗痰热及湿热证候，这些证候会影响胆囊和胃的功能，该方剂传统上具有清热、燥湿、化痰的功效。它常被用于治疗与痰热相关的代谢紊乱，包括脂肪肝疾病。然而，黄连温胆汤的治疗效果及其关键成分对MASH的作用机制仍有待进一步阐明。

**研究目的**
本研究旨在评估黄连温胆汤及其关键成分在MASH中的抗炎和调节血脂作用，并探讨其背后的分子机制。

**材料与方法**
雄性C57BL/6J小鼠被喂食蛋氨酸-胆碱缺乏饮食，通过口服给予低剂量或高剂量的黄连温胆汤，非诺贝特作为阳性对照。评估指标包括体重、肝指数、血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平、血清脂质谱以及肝脏甘油三酯和总胆固醇含量。通过H&E染色、油红O染色和Masson三色染色评估组织病理学变化。利用免疫荧光检测肝脏巨噬细胞浸润情况，ELISA法测定炎症细胞因子，western blotting分析关键的信号传导和脂质代谢相关蛋白。UPLC-MS/MS技术用于分析黄连温胆汤颗粒的化学成分并确定其主要成分。通过整合多个数据库的网络药理学分析，结合GO和KEGG富集分析，预测潜在靶点和通路。进一步通过分子对接和分子动力学模拟研究化合物与靶标之间的相互作用。体外细胞存活率通过CCK-8试验测定，蛋白质水平通过western blotting确认，细胞内脂质积累情况则通过油红O染色评估。

**结果**
UPLC-MS/MS分析表明，黄连温胆汤的主要生物活性成分是一种异喹啉类生物碱——小檗碱。网络药理学分析提示，黄连温胆汤和小檗碱可能通过调控多种靶点和通路发挥抗MASH作用，这些靶点和通路包括IL-6、PPARα以及NF-κB/HDAC1/SREBP-1c轴。体内实验结果支持了这一预测，证实了黄连温胆汤对MASH的保护作用。体内和体外研究还表明，小檗碱通过抑制NF-κB/HDAC1/SREBP-1c轴显著改善与MASH相关的表型。此外，分子对接和动力学模拟显示，小檗碱与该轴内的重要蛋白之间存在稳定结合。微尺度热泳试验进一步证明了小檗碱可与HDAC1直接结合。总体而言，这些研究结果表明，黄连温胆汤及其关键活性成分小檗碱可通过抑制与炎症反应和脂质生成异常密切相关的NF-κB/HDAC1/SREBP-1c轴来缓解MASH。

**结论**
黄连温胆汤通过减轻肝脏炎症和脂质生成，显著改善MASH的表型，其中NF-κB/HDAC1/SREBP-1c轴是连接炎症信号传导与异常脂质合成的关键机制。UPLC-MS/MS分析确定小檗碱是黄连温胆汤的主要活性成分，它能够再现上述作用，并且可直接与HDAC1结合，这证明了其在黄连温胆汤抗MASH作用中的重要作用。

**引言**
代谢功能障碍相关脂肪肝病（MAFLD）， formerly称为非酒精性脂肪肝病（NAFLD），是全球最常见的慢性肝病，约38%的成年人患有此病（Rinella等人，2023；Younossi等人，2023）。代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）是MAFLD疾病进展中的关键阶段，它会促使疾病发展为肝硬化和肝细胞癌。其组织病理学特征包括脂肪变性、肝细胞损伤、炎症和纤维化（Au和Yang，2025）。随着全球肥胖和2型糖尿病发病率的上升，预计未来十年MAFLD及其并发症，尤其是与MASH相关的肝硬化和肝细胞癌的负担将会大幅增加（Guo等人，2025；Younossi等人，2019）。因此，开发有效的MASH治疗策略至关重要。尽管美国食品药品监督管理局已批准雷米替罗用于治疗无肝硬化但存在中度至重度纤维化的MASH患者，但该药物仍存在一定的治疗局限性（Harrison等人，2024）。因此，仍迫切需要具有更好疗效的新型多靶点药物。

中医长期以来一直被用于治疗类似MAFLD的疾病，在中医理论中，这类疾病通常被归类为“肝脾失调”或“积聚”。黄连温胆汤最早记载于《刘渊辨方》，由八味中药组成：黄连、半夏、竹茹、枳实、陈皮、生姜、茯苓和甘草。临床研究表明，黄连温胆汤可改善代谢综合征和非酒精性脂肪肝患者的代谢紊乱和肝脏脂肪变性（Liu等人，2024；Shantong和Shiliang，2009；Shaoying等人，2018；Shifeng Xiao，2025；Xiaoai等人，2018；Xiaoqing等人，2023）。先前的研究显示，黄连温胆汤可增加肠道中阿克曼氏菌的数量，通过肠-肝轴调节天冬氨酸代谢，激活LKB1/AMPK信号通路，并通过CPT1A和PPARα促进脂质氧化，从而改善MAFLD（Zhu等人，2025）。此外，还有研究指出，黄连温胆汤可抑制肝脏组织和血管中的M1型巨噬细胞极化，同时促进M2型巨噬细胞极化，进而通过PPARγ/NF-κB通路改善肝脏的促炎微环境，恢复代谢功能（Liu等人，2025；Su等人，2025）。进一步的研究表明，其抗炎作用还与减轻焦亡反应和抑制NLRP3炎性小体活化密切相关（Jia等人，2018；Li等人，2021）。然而，由于黄连温胆汤的化学结构较为复杂，其抗MASH作用的具体机制仍不清楚。

网络药理学作为一种系统的药物发现方法，与中医的整体观念十分契合（Ding等人，2024）。构建与疾病、生物活性成分及信号通路相关的多层网络，有助于识别中药方剂功效背后的核心分子靶点和药理网络（Liang等人，2014）。超高效液相色谱-串联质谱技术是分析中药生物活性成分并评估其质量的重要工具（Qian等人，2025）。分子对接、分子动力学模拟和微尺度热泳等辅助方法，则可用于评估配体与靶标之间的相互作用及结合稳定性。因此，在本研究中，我们首先利用网络药理学预测黄连温胆汤的抗MASH机制并确定其主要生物活性成分，随后通过整合的体内和体外实验进行验证。这些研究结果为进一步探究黄连温胆汤在MASH中的作用机制及其潜在临床应用提供了依据。

**材料与试剂**
黄连温胆汤颗粒由广东省中医院提供。各单味中药颗粒由江阴天江药业有限公司生产，其规格和原料来源的详细信息见表1。该方剂是根据传统的中草药比例准确混合各单味颗粒后制成的多味中药颗粒制剂。在使用前立即配制。

**黄连温胆汤中化学成分的鉴定及网络药理学机制的预测**
在正负离子模式下采集的不同质量控制样本的总离子色谱图在保留时间和峰强度方面高度重叠，表明该分析方法的重复性和稳定性良好（图S1A）。黄连温胆汤的化学成分主要为生物碱、黄酮类、木脂素和香豆素、酚酸、醌类、单宁以及萜类化合物。其中的代表性化合物包括去甲小檗碱等。

**讨论**
MASH属于代谢功能障碍相关脂肪肝病（MAFLD）范畴中的炎症和纤维化表现，它是慢性肝病的主要原因之一，会显著推动肝硬化、肝细胞癌的发展，并增加死亡风险（Noureddin等人，2024）。广为认可的“多因素作用假说”认为，MASH是由炎症、脂质代谢紊乱等多种因素的协同作用共同导致的。

**CRediT作者贡献声明**
宋庆亮：可视化、数据整理。刘良浩：写作——审稿与编辑、正式分析。潘金月：数据整理。黄思远：验证、数据整理。杨琴河：方法学、资金获取。张月静：数据整理。张宇佩：监督、项目管理、方法学、资金获取。潘茂兴：方法学、资金获取、概念设计。温帆：写作——审稿与编辑、初稿撰写、正式分析、数据整理。

**利益冲突声明**
作者声明不存在与本文相关的任何利益冲突。

**数据可用性**
数据将在收到请求后提供。

**资金支持**
本研究得到了以下机构的资助：国家自然科学基金（编号：82374230、82405209、82574885）、广州市中医药重大科技项目（编号：2025CX006）、中国博士后科学基金会（编号：2024M751135）、中国中央高校基本科研业务费（编号：21624359）、广东省中医药局（编号：20251076）、国家级名老中医药专家传承工作室建设项目等。

**利益冲突声明**
? 作者声明不存在任何可能影响本文研究的已知财务利益或个人关系。

**致谢**
本研究中的机制示意图由BioRender.com制作。