综述：RNA m6A甲基化在食管鳞状细胞癌中的诊断和治疗潜力

《Genes & Diseases》：Diagnostic and therapeutic potential of RNA m6A methylation in oesophageal squamous cell carcinoma

RNA甲基化（RNA methylation），一种表观遗传修饰（epigenetic modification），显著影响食管鳞状细胞癌（oesophageal squamous cell carcinoma, ESCC）的发生和发展。异常的RNA甲基化（RNA methylation）破坏了对细胞周期调控、凋亡和肿瘤抑制至关重要的基因，最终驱动肿瘤发生。RNA甲基化还与干细胞维持密切相关。此外，RNA甲基化影响微小RNA（microRNA）表达，这是一种基因调控的转录后机制，从而促进肿瘤生长和存活。这些表观遗传变化在ESCC中具有临床相关性，可作为诊断、预后和治疗反应评估的潜在生物标志物。因此，逆转或抑制异常的RNA甲基化以恢复正常的基因表达，可能为ESCC提供新的治疗策略。

**Introduction**
食管癌（oesophageal carcinoma, EC）是人类最常见的恶性肿瘤之一，在中国其死亡率居所有癌症第四位。中国EC发病率和死亡率全球最高，占全球EC病例的50%。EC主要分为两种病理亚型：食管鳞状细胞癌（oesophageal squamous cell carcinoma, ESCC）和食管腺癌（oesophageal adenocarcinoma, EAC）。由于ESCC早期症状不明显，多数患者确诊时已处于晚期，给治疗带来重大挑战并影响生存率。ESCC风险受吸烟、饮酒、蔬果摄入不足、病毒感染及慢性胃食管反流等多种因素影响，增加了疾病预防和治疗的复杂性。尽管医疗技术不断进步，ESCC的治疗仍具挑战，尤其对于晚期患者。当前治疗方法包括手术、放疗、化疗等，但常伴有副作用，影响患者身心健康。因此，研究ESCC肿瘤发生的机制可能有助于改进诊断和治疗方法。已鉴定出超过170种RNA化学修饰，包括信使RNA（mRNA）、转运RNA（tRNA）、核糖体RNA（rRNA）、小非编码RNA（sncRNA）和长链非编码RNA（lncRNA）。其中，RNA甲基化（RNA methylation）是最重要的转录后修饰之一，约占所有RNA修饰的三分之二。RNA甲基化由甲基转移酶（writers）、特异性RNA甲基化识别蛋白（readers）和去甲基化酶（erasers）介导，是一个动态可逆的过程，调控RNA的定位、核输出、剪接、翻译、稳定性、转位和降解等，从而调节多种疾病的发生发展。

**Types of RNA methylations**
RNA甲基化涉及将甲基基团转移到RNA分子上的特定位置，主要发生在核碱基的氮和碳原子以及核糖2'-OH基团的氧原子上。主要类型包括N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine, m6A）、N1-甲基腺苷（N1-methyladenosine, m1A）、5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine, m5C）、5-羟甲基胞嘧啶（5-hydroxymethylcytosine, hm5C）、假尿苷（pseudouridine, Ψ）、肌苷（inosine, I）、核糖甲基化（2’-O-methylation）和尿苷（uridine, U）。这些修饰在RNA分子上分布模式多样。例如，m6A甲基化普遍存在于3‘-UTR和5’-UTR的共有基序中，参与翻译调控；m1A修饰虽不如m6A常见，但出现在mRNA所有区域，尤其在结构化的5‘-UTR中；m5C修饰发生在编码区和非编码区，尤其富含GC的区域，其位置影响转录；hm5C修饰更常见于编码区，其丰度由Tet酶活性决定；Ψ修饰分布多样；I修饰广泛存在于编码序列（CDS）中；U修饰倾向于积累在3’-UTR中；2‘-O-methylation发生在编码特定氨基酸的mRNA特定区域。除mRNA外，tRNA和rRNA也经历多种修饰，包括Ψ和m1A。一种新型双甲基化修饰1, N6-二甲基腺苷（1, N6-dimethyladenosine, m1,6A）在tRNA第58位被鉴定，广泛分布于哺乳动物细胞和组织中，水平范围为0.0049%-0.047%。甲基转移酶样5（METTL5）介导的18S rRNA m6A甲基化下调会损害80S核糖体组装并抑制与脂肪酸代谢相关的mRNA翻译。核仁甲基化因子（NML）参与28S rRNA的m1A修饰和60S核糖体亚基形成，NML缺失以p53依赖性方式抑制细胞增殖。此外，lncRNA和sncRNA的RNA甲基化也得到广泛研究。

**Expression patterns of related proteins in ESCC**
在ESCC中已鉴定出多种RNA甲基化修饰相关蛋白的改变，包括m6A、m5C、m1A、m7G和I修饰。其中，m6A甲基化在ESCC中研究最为广泛，与食管癌风险密切相关，其作用通过体内和体外研究逐步验证。与其他RNA甲基化类似，m6A甲基化通过writer、eraser和reader蛋白调控RNA功能。这些蛋白的表达模式在表1中总结，不同研究结果基本一致，但AlkB同源物5（ALKBH5）除外。ALKBH5在KYSE450细胞中水平高于Het-1A细胞，但另一研究报道在73%的ESCC标本中检测到低ALKBH5表达。此外，m6A与多种蛋白相互作用，包括癌基因、转录因子和信号转导因子。转录因子E2F1结合Nop2/Sun RNA甲基转移酶2（NSUN2）启动子，增加NSUN2表达，进而导致生长因子受体结合蛋白2（GRB2）的m5C修饰显著增加。基于九个m5C相关lncRNA构建的预后特征（m5C-LPS）在ESCC中得到验证，低m5C-LPS评分患者生存期更长，M2巨噬细胞水平更低，对化疗和放疗更敏感，免疫检查点分子如程序性细胞死亡蛋白1（PD-1）、PD-1受体（PD-L1）和细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4（CTLA-4）水平更高，提示m5C-LPS可能作为预测ESCC预后和指导个性化治疗的生物标志物。ESCC相关长链非编码RNA1（ESCCAL-1）受m1A去甲基化酶ALKBH3调控，维持ESCC细胞干细胞样特征。基于m7G谱开发的m7G相关lncRNA预后特征（m7G-LPS）包含七个m7G相关预后lncRNA，可预测预后，高风险亚组免疫评分、基质评分、免疫细胞浸润水平和免疫检查点表达均高于低风险亚组。作用于RNA的腺苷脱氨酶（ADAR）通过催化异常的腺苷-肌苷（A-to-I）RNA编辑改变RNA结构，ADAR1在原发性ESCC肿瘤中过表达，介导AZIN1 mRNA的A-to-I编辑，编辑频率在肿瘤中显著高于匹配非肿瘤标本，提示ESCC进展中存在高编辑表型。

**Molecular mechanisms and components involved in RNA m6A methylation**
甲基转移酶通过将甲基从S-腺苷-L-甲硫氨酸（SAM）转移到腺苷残基的N6位点，催化RNA分子上m6A的添加。其中，METTL3含有甲基转移酶结构域和催化亚基，是主要催化酶；METTL14和WTAP辅助核心酶招募至底物或稳定m6A位点。此外，NSUN家族蛋白参与非编码RNA（包括lncRNA和sncRNA）的m6A甲基化，在RNA加工和稳定中起重要作用。随后，reader蛋白识别m6A位点并与修饰后的RNA结合，包括mRNA、lncRNA和miRNA。关键成员包括YTHDF1/2/3、YTHDC1/2、HNRNPC/G、eIF3、IGF2BPs和HNRNPA2B1。HNRNPA2B1与mRNA和miRNA相互作用，调节miRNA稳定性和加工，其含有的YTH结构域（50-60个氨基酸）能特异性结合m6A修饰的RNA，进一步影响mRNA稳定性、翻译和可变剪接。相反，eraser蛋白去除m6A甲基化。FTO是与肥胖、糖尿病和癌症等疾病相关的特征性去甲基化酶，与ALKBH家族成员（ALKBH1/3/5）共同作为主要去甲基化酶。ALKBH家族与FTO在结构上相似且具有相当酶活性，参与RNA代谢和基因表达调控等细胞过程。在特定应激下，eraser确保基因表达的动态调控。此外，RNA结合蛋白和核输出因子与m6A机器相互作用，共同调节RNA的可及性和运输。m6A甲基化还可诱导染色质结构变化并招募组蛋白修饰酶，从而参与基因表达的表观遗传调控。

**Recent advances in RNA m6A methylation research in ESCC**
m6A甲基化是一个动态可逆的过程，精细调控RNA剪接和翻译效率等关键生物学功能，因此在ESCC的发生和进展中发挥重要作用，表2总结了ESCC中多种RNA的m6A甲基化。

**m6A methylation of mRNA in ESCC**
m6A甲基化通过多种机制调控翻译和转录后基因表达。METTL3在ESCC中上调，增强腺瘤性息肉病大肠杆菌（APC）mRNA的m6A甲基化，招募YTHDF蛋白介导mRNA降解，稳定β-连环蛋白表达，促进有氧糖酵解、增殖和肿瘤发生。METTL3过表达导致TNFR1 RNA过度m6A甲基化，通过ATXN2依赖性调控促进翻译，激活丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和核因子κB（NF-κB）通路，促进肿瘤发生和进展。METTL3还调控多种下游RNA分子，包括GLS2、IFIT2、NAT10、FAM135B、AMIGO2和METTL1，促进ESCC增殖、迁移、侵袭、转移或改变免疫环境。相比之下，METTL14介导的ACSL4 m6A甲基化加速辐射诱导的铁死亡。WTAP在ESCC中表达显著升高，增加CPSF4 mRNA的m6A甲基化，导致其降解，增强ESCC细胞增殖、侵袭和迁移能力，最终导致不良预后。此外，蛋白酪氨酸磷酸酶IVA型成员1（PTP4A1）也被鉴定为WTAP的m6A修饰靶点，随后激活AKT-mTOR通路促进ESCC细胞增殖。在m6A eraser蛋白中，FTO去甲基化酶在ESCC细胞中显著上调，FTO介导的ERBB2去甲基化增加ERBB2 mRNA稳定性，促进ESCC增殖、迁移和侵袭。在m6A reader蛋白IGF2BPs中，IGF2BP1增强INHBA mRNA稳定性，增加INHBA蛋白水平，激活Smad2/3信号，促进ESCC细胞侵袭和迁移。IGF2BP2识别肝细胞癌衍生生长因子（HDGF）mRNA的m6A甲基化位点，以m6A依赖性方式稳定HDGF，促进体外增殖、迁移、侵袭和体内肿瘤发生。IGF2BP2还结合EIF4A1 mRNA的m6A位点，通过增强EIF4A1翻译促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭。BCLAF1通过结合reader蛋白YTHDF2稳定m6A修饰的SIX1 mRNA，防止其降解，从而重新激活SIX1。此外，RPS15与IGF2BP1的K同源结构域相互作用，以m6A依赖性方式识别并直接结合MKK6和MAPK14 mRNA的3’-UTR，促进p38 MAPK通路关键蛋白的翻译。

**m6A methylation of ncRNAs in ESCC**
非编码RNA（ncRNA）包括miRNA和lncRNA，是一类不编码蛋白质的RNA分子。m6A甲基化调控miRNA代谢的多个方面。例如，METTL3与DGCR8的相互作用以m6A依赖性方式正向调控pri-miR-320b的成熟。类似地，METTL14通过DGCR8依赖性m6A甲基化正向调控pri-miR-99a加工。此外，RBM15促进miR-3605-5p的m6A甲基化，该miRNA随后靶向角蛋白4（KRT4）以促进ESCC细胞活力和迁移。lncRNA是一类长度超过200个核苷酸的内源性ncRNA。在ESCC中，上调的FTO抑制LINC00022的m6A甲基化，从而阻止其被m6A reader YTHDF2降解。FTO去甲基化并稳定长基因间非编码RNA激酶激活（LINK-A），促进ESCC细胞增殖和化疗耐药。LINC00858上调ZNF184表达，并将其招募至FTO基因启动子，增强FTO表达。FTO表达升高去除MYC mRNA上的m6A甲基化，导致MYC蛋白水平上调，促进ESCC细胞增殖、迁移、侵袭并诱导抗凋亡效应。此外，上调的TRA2A促进致癌lncRNA MALAT1的甲基化，增强其细胞稳定性、增殖能力和肿瘤形成。环状RNA也可被m6A甲基化修饰。METTL3介导的circ_0006168 m6A甲基化通过IGF2BP2增加其表达，circ_0006168表达升高通过miR-384/STAT3/Snail轴促进ESCC细胞迁移和侵袭。

**Potential of RNA m6A methylation in the diagnosis, prognosis, and treatment of ESCC**
**As a diagnostic biomarker**
由于RNA m6A甲基化与ESCC发生和进展密切相关，目前研究主要关注鉴定特定RNA靶标的m6A甲基化水平作为癌症诊断和分类的潜在生物标志物。MALAT1上的串联m6A残基作为招募m6A reader YTHDC1及其相互作用伙伴至核斑点的支架，影响癌基因表达。MALAT1-m6A缺失诱导的表型可通过人工连接YTHDC1与MALAT1得以恢复，因此MALAT1的m6A甲基化水平可能作为评估肿瘤转移的可靠生物标志物。此外，WTAP蛋白水平在ESCC中显著高于癌旁非肿瘤组织，并与淋巴结转移和TNM分期相关，提示其在生存预测中的潜在应用。

**As a prognostic biomarker**
迄今已有大量研究探讨m6A甲基化及其相关蛋白作为ESCC预后生物标志物的潜力。例如，METTL3表达升高已在ESCC组织中得到验证，可用于预测预后。高METTL3表达与不良预后相关，而高METTL14表达与较好预后相关。此外，富含亮氨酸的PPR基序蛋白（LRPPRC）可能作为独立预后指标，它降低JAK2、STAT3和MYC的m6A甲基化以增强核mRNA输出和表达，并作为支架增加JAK2-STAT3复合物稳定性。靶向LRPPRC/JAK2/STAT3/MYC轴可抑制肿瘤生长。lncRNA CASC8在ESCC中常过表达，与不良预后相关，通过稳定异质核核糖核蛋白L（hnRNPL）和激活Bcl2/caspase3通路增强肿瘤生长和顺铂耐药。CASC8表达受ALKBH5介导的m6A去甲基化调控，因此CASC8可能作为ESCC预后生物标志物。值得注意的是，吸烟增强ALKBH5表达，下调LINC00278的m6A甲基化，从而抑制YY1BM翻译，促进ESCC进展。因此LINC00278和YY1BM可能作为ESCC预后生物标志物和治疗靶点。除m6A相关分子外，m5C相关分子也可能作为ESCC生物标志物。例如，m5C甲基转移酶NSUN2催化lncRNA NMR上胞嘧啶转化为m5C，稳定并上调NMR，使NMR与染色质调控因子BPTF相互作用，调节MMP3和MMP10表达。NMR促进肿瘤细胞迁移和侵袭，抑制顺铂诱导的凋亡，增加ESCC细胞耐药性，因此可能作为预测转移和预后的生物标志物及潜在治疗靶点。此外，NSUN2诱导GRB2 mRNA的m5C修饰，通过LIN28B结合稳定，促进ESCC细胞增殖、迁移和侵袭。因此GRB2 mRNA的m5C修饰可能作为ESCC潜在预后生物标志物。近期研究显示，YBX1通过NSUN2介导的m5C修饰稳定SMOX mRNA，激活mTOCR1通路，促进ESCC生长，揭示了新的预后生物标志物，并为开发表观转录组疗法提供参考。除单个基因外，包含多个m6A相关调控因子的组合也可作为预后生物标志物。从癌症基因组图谱（TCGA）获取ESCC患者RNA测序数据、临床信息和免疫细胞数据，根据m6A RNA甲基化调控因子表达进行共识聚类分析，构建了包含HNRNPC、RBM15、IGF2BP3、METTL16和KIAA14297五个m6A甲基化调控因子的基因特征和风险模型，准确预测ESCC患者预后。六个m6A相关自噬基因（DAPK2、DIRAS3、EIF2AK3、ITPR1、MAP1LC3C和TP53）已用于预测ESCC生存。因此，包含多个m6A相关基因或蛋白的生物标志物组合将有助于未来精准医学。

**As a therapeutic target**
由于m6A RNA修饰相关蛋白在ESCC组织中表达高于癌旁正常组织，并激活一系列致癌信号通路，靶向RNA修饰或相关酶代表了一种有前景的肿瘤治疗策略，目前已有少数小分子抑制剂被开发。鉴于m6A调控因子在ESCC发生和进展中的重要作用，它们可能成为该疾病的有前景治疗靶点。例如，KAT2A通过增加METTL3启动子H3K27乙酰化增强其表达，而SIRT2负调控METTL3转录。METTL3增强EGR1 mRNA的m6A甲基化，随后YTHDF3结合甲基化位点并稳定mRNA，激活EGR1/Snail信号通路。最初用于治疗HIV感染的埃替拉韦（Elvitegravir）已被证明通过靶向METTL3并增强其经STUB1调控的蛋白酶体降解来抑制转移。作为m6A reader，IGF2BP1优先识别m6A修饰的mRNA并增强其稳定性，结合并稳定INHBA mRNA，增加INHBA蛋白表达，激活IHNBA-Smad2/3通路，这对ESCC细胞侵袭至关重要。结构特异性抑制剂BTYNB阻断IGF2BP1与INHBA mRNA的结合，减弱过表达IGF2BP1的ESCC细胞的恶性特性。此外，化合物C6（一种1,2,3-三唑-吡啶杂合物）作为FTO抑制剂，调节上皮-间质转化和PI3K/AKT通路，抑制ESCC发展。C6在体内表现出强效、耐受良好的抗肿瘤作用，突显其作为低毒口服抗癌药物的潜力。

**RNA m6A methylation itself serves as a biomarker or therapeutic target of ESCC**
RNA m6A甲基化本身无疑可作为ESCC的生物标志物和治疗靶点，积累的证据支持这一点。例如，与化疗耐药ESCC细胞中FTO表达上调一致，m6A斑点印迹实验显示，化疗耐药细胞中整体m6A水平显著低于亲代细胞。另一项研究分析五名ESCC患者的单细胞转录组数据，探讨m6A mRNA甲基化如何影响主要肿瘤微环境（TME）细胞（包括巨噬细胞、T细胞和B细胞）。通过RNA甲基化调控因子的m6A非负矩阵分解聚类，在每个ESCC TME细胞亚群中鉴定出不同的m6A mRNA甲基化模式。这些模式与肿瘤上皮细胞表现出广泛多样的相互作用，并在细胞特征、转录特征和患者预后之间具有独特相关性。这项研究首次证明m6A mRNA修饰可能驱动TME-肿瘤细胞串扰，加速ESCC进展。此外，m6A甲基化RNA免疫沉淀测序（MeRIP-seq）显示，m6A修饰位点选择性定位于靶转录本翻译终止密码子附近的GGAC基序。基因本体分析进一步揭示这些转录本富集于癌症相关信号通路，包括Notch通路（肿瘤发生的关键驱动因素）。具体而言，Notch通路核心组分NOTCH1在其翻译终止密码子附近表现出强且特异的m6A甲基化。机制上，甲硫氨酸通过SAM增强METTL3介导的RNA m6A甲基化，调控下游基因表达，该级联反应也驱动临床ESCC组织中m6A水平升高。更重要的是，另一项研究首次报道，在放射耐药ESCC细胞中，METTL3表达和METTL3介导的m6A甲基化高于亲代细胞。此外，METTL3介导的m6A甲基化定位于端粒重复序列RNA（TERRA）的亚端粒区域，使用m6A特异性抗体可下拉TERRA上的m6A信号，METTL3敲低后这些现象减弱，表明METTL3催化TERRA的m6A甲基化。总之，m6A水平与ESCC细胞存活、增殖、化疗耐药和放射耐药密切相关。高METTL3表达始终与侵袭性表型相关，并通过单细胞测序、m6A MeRIP-seq、体外和体内实验以及ESCC患者样本分析等综合方法验证。使用METTL3抑制剂的临床研究主要集中在癌症治疗。STC-15是首个进入I期临床试验的METTL3小分子抑制剂，用于治疗晚期实体瘤和血液系统恶性肿瘤。这些抑制剂在抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭方面显示出显著疗效，尤其与ESCC相关，它们通过调节m6A修饰基因的表达、破坏致癌信号通路，最终抑制METTL3来抑制ESCC进展和转移。

**Conclusions**
关于ESCC病理机制和致病因素的研究逐步推进。当前治疗选择包括手术、化疗、放疗和新辅助放化疗，此外，靶向治疗和免疫治疗被提出作为ESCC的新策略。先前研究中建立了肽适体库，并鉴定出靶向SOX2蛋白的肽适体P42，P42肽适体表达和合成P42均减弱ESCC细胞体外和体内恶性行为。此外，PARP1和CDP蛋白分别与SOX2结合，用3-ABA或肽适体P58靶向PARP1或CDP可抑制ESCC细胞多种恶性过程。巴西蘑菇和浒苔来源多糖对ESCC类器官的治疗效果也已得到证实。因此，鉴定治疗靶点以设计新药或重新利用现有药物可能提高ESCC治疗效果。ESCC研究中一个有趣的话题是肿瘤抑制基因启动子甲基化的调控。肿瘤抑制基因失活通常与肿瘤细胞生长和分裂控制、DNA修复和肿瘤形成相关。这些基因启动子区域甲基化导致其沉默，从而促进癌症发展。一旦潜在机制完全阐明，可靶向m6A甲基化调控靶RNA的稳定性或降解。m6A甲基化发生在多种RNA类型中，包括miRNA和lncRNA，几乎参与所有生理过程。如果利用基因编辑改变基因组中的m6A甲基化位点，可抑制下游过程。此外，受外泌体影响的病理生理过程（如耐药性或免疫反应）也可被调控，因为功能性RNA包装在外泌体中。RNA甲基化是一种表观遗传机制，涉及将甲基基团添加到RNA分子特定位置，影响RNA稳定性、加工和功能，因此在包括ESCC在内的癌症发生和进展中发挥重要作用。m6A是一种复杂的RNA修饰，已有多种参与该修饰的蛋白和调控因子被鉴定。例如，YTHDC2中的单核苷酸多态性和细胞内具核梭杆菌感染已被证明可调控m6A RNA甲基化过程。然而，需要鉴定更多促进m6A甲基化的因素，并全面研究其潜在机制，以拓宽潜在治疗靶点范围。此外，m6A甲基化上游蛋白调控机制值得深入探讨。靶向m6A机器的小分子药物可有效调控m6A甲基化。鉴于m6A甲基化调控癌症进展，可利用基因编辑技术（如CRISPR/Cas9）阻断基因组中特定核苷酸的修饰，从而实现治疗效果。尽管取得了显著进展，转化挑战仍然存在。在分子水平上，调控蛋白常共享保守结构域，如ALKBH家族/FTO催化结构域和YTH结构域，这对开发特异性抑制剂构成主要障碍。未解决的问题包括参与A-to-I编辑和假尿苷修饰的未表征eraser和reader，上游机制探索不足，以及其对ESCC恶性过程（特别是血管生成）的未验证效果。在转化水平上，功能依赖性（如METTL3的胚胎致死性与其在ESCC中的致癌作用）需要精确的时间和靶向递送。同时，必须建立平衡抑制策略，因为单一抑制剂存在脱靶效应，且METTL3等蛋白具有多功能性（还具有转录作用）。ESCC诊断的局限性包括低丰度修饰相关蛋白的抗体检测交叉反应性，以及肿瘤异质性带来的解释复杂性。新技术提供了克服这些挑战的途径。例如，dCas13b-ALKBH5融合靶向MYC（一种CRISPR介导的位点特异性RNA编辑）可实现癌基因精准调控，而靶向甲基化位点的反义寡核苷酸可能为ESCC提供位点特异性调控。整合天然产物库、AI辅助对接和定量构效关系的模型极大加速了潜在抑制剂的筛选过程。多种新技术，包括长读长纳米孔测序、单细胞RNA-seq和空间RNA-seq，可检测具有异构体分辨率和动态转录组图谱的修饰。此外，AI整合大数据分析促进生物标志物发现。使用N1-甲基假尿苷等修饰优化的mRNA疫苗，与传统疗法结合时提供个性化治疗潜力。总之，RNA m6A甲基化在ESCC发生和进展中作为关键角色和调控机制发挥作用。因此，RNA m6A甲基化相关组分代表有前景的生物标志物和治疗靶点。未来研究应聚焦于鉴定未表征的调控因子和上游网络，并验证其在ESCC进展中的作用。通过开发特异性抑制剂和优化递送策略消除转化障碍至关重要。整合天然产物筛选、AI辅助药物设计和CRISPR/cas9介导的基因编辑有望推动这些治疗方法从实验室走向临床，从而促进ESCC精准诊断和治疗，并为其他RNA修饰相关疾病提供有价值的模型。