直接定量PCR技术可检测利什曼病犬只临床样本中的抗利什曼病药物耐药性遗传生物标志物

《BMC Veterinary Research》：Direct quantitative PCR detects genetic biomarkers of antileishmanial drug resistance in clinical samples from dogs with leishmaniosis

　　

摘要

背景

犬类利什曼病的治疗效果受犬只宿主、利什曼原虫以及药物因素的影响，而药物耐药性日益削弱治疗的效力。目前检测抗利什曼病药物耐药性的方法依赖培养技术，这类方法不仅速度慢且技术要求高。本研究将一种直接定量PCR检测方法（LeishGenR?）应用于地中海地区95只被兽医诊断为利什曼病且PCR检测呈利什曼婴儿原虫阳性的犬只的104份临床样本。该检测方法能够快速识别别嘌醇（metk）、硫酸锑镁（mrpa）和米曲膦酸（LdMT）的基因耐药性生物标志物，通过直接分析循环中的利什曼婴儿原虫无鞭毛体，为培养法提供了一种具有临床意义且更快捷的替代方案。

结果

该检测方法（LeishGenR?）在识别基因耐药性特征方面具有极高的特异性（100%）和灵敏度（＞87.5%），并且与全基因组测序在基因拷贝数检测方面也存在较强相关性（metk：r=0.878；mrpa：r=0.943；LdMT：0.691）。在所分析的临床样本中，24.3%的利什曼婴儿原虫 DNA存在基因耐药性生物标志物（20/82；95%置信区间为16.3–34.6），其中以别嘌醇相关标志物最为常见（13.4%；95%置信区间为7.6–22.4），其次是硫酸锑镁相关标志物（9.4%；95%置信区间为4.6–18.2），米曲膦酸相关标志物则较少见（5.4%；95%置信区间为1.8–14.8）。曾经接受过利什曼病治疗的犬只中，这类标志物的出现频率更高。

结论

本研究证明了可直接从患利什曼病的犬只的临床样本中检测出利什曼婴儿原虫的基因耐药性生物标志物。该方法能够快速、准确地识别基因组生物标志物，避免了培养法带来的延迟问题，有助于实现更有效的临床管理和疾病监测。在本研究涉及的地中海地区，那些寄生虫载量较高的犬只中，有相当比例的循环利什曼婴儿原虫菌株对用于治疗犬类利什曼病的常规药物存在基因耐药性。