《Veterinary Research Communications》：Molecular characterization of Cytauxzoon brasiliensis in domestic cats (Felis catus) from Rio de Janeiro state, Brazil: hematological findings
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*Cytauxzoon* spp. 是一类蜱传血原虫（tick-borne haemoprotozoans），可感染家猫和野生猫科动物，在兽医学和媒介传播病原体的流行病学中日益受到关注。在巴西，这些病原体在野生猫科动物中的遗传多样性逐渐扩大，最终描述了*Cyt
*Cytauxzoon* spp. 是一类蜱传血原虫（tick-borne haemoprotozoans），可感染家猫和野生猫科动物，在兽医学和媒介传播病原体的流行病学中日益受到关注。在巴西，这些病原体在野生猫科动物中的遗传多样性逐渐扩大，最终描述了*Cytauxzoon brasiliensis*。然而，该物种在家猫中的发生情况尚不清楚。因此，本研究旨在检测并分子特征化（molecularly characterize）巴西里约热内卢州家猫中的*C. brasiliensis*，并描述阳性动物中观察到的主要血液学发现。研究人员分析了共计404份家猫血液样本，采用靶向18S rRNA基因（18S rRNA gene）的巢式PCR（nested PCR），随后利用线粒体cytB基因（mitochondrial cytB gene）进行分子特征化。阳性样本进行了相似性（similarity）、系统发育（phylogenetic）和单倍型多样性（haplotype diversity）分析。同时评估了阳性动物的血液学数据，并针对其他血原虫和感染性病原体进行了差异分子诊断。在基于18S rRNA的检测中，4份样本（约1%）对*Cytauxzoon* sp.呈阳性，其中3份在血涂片中显示红细胞内包涵体，提示为梨形虫（piroplasms）。获得的序列在系统发育上与先前在巴西野生猫科动物中鉴定为*C. brasiliensis*的分离株聚类，证实了该病原体在家猫中的存在。血液学分析显示，所有4只阳性动物均出现血小板减少（thrombocytopenia），2只动物出现贫血（anemia），并伴有不同程度的白细胞异常（leukocyte abnormalities）。未检测到巴通体属（*Bartonella* spp.）、血支原体（hemoplasmas）、无形体科（Anaplasmataceae）成员或婴儿利什曼原虫恰加斯亚种（*Leishmania infantum chagasi*）。这些结果首次证明了里约热内卢州家猫感染*C. brasiliensis*，并强调需要将该病原体纳入猫血原虫病（feline hemoparasitoses）的鉴别诊断中。此外，研究结果提示感染可能与显著的血液学改变相关，但仍需纳入更多动物和更稳健的临床-流行病学设计的研究，以阐明其对宿主的实际致病影响。
**论文解读文章**
**研究背景**
*Cytauxzoon* 属（Apicomplexa: Theileriidae）是一类经蜱传播的血原虫，可感染全球不同地区的野生及家养猫科动物。在美国，*Cytauxzoon felis* 被确认为引起家猫急性、全身性且常致死的细胞虫病（feline cytauxzoonosis）的病原体。然而，随着更为灵敏的分子方法的广泛应用，研究者认识到猫科动物中的 *Cytauxzoon* 感染谱更为宽广，包括亚临床感染和慢性携带状态，尤其在某些地理区域和流行病学背景下。近年来，该属的知识大幅拓展：欧洲在野生猫科动物中描述了新种；亚洲在家猫中报告了感染，揭示了显著的遗传多样性。在南美洲，研究显示该组的遗传多样性超出原先假设。在巴西，最初的家猫报告表明 *Cytauxzoon* spp. 可在临床健康动物中循环，但这些研究多基于短片段18S rRNA基因，该标记对区分系统发育上密切相关的物种分辨力有限。因此，在巴西检测到的分离株的实际分类学身份仍不确定。这一局限性在2024年正式描述 *Cytauxzoon brasiliensis*（基于虎猫 *Leopardus tigrinus* 的形态学、组织病理学和分子证据，包括核和线粒体标记）后变得更为突出。随后更广泛的系统发育分析强调，单独使用短18S rRNA片段不足以可靠界定该属的物种，而线粒体标记（如 cytB 基因）提供更强的区分能力。因此，*C. brasiliensis* 的描述迫使研究者对巴西家猫中一些先前 *Cytauxzoon* sp. 的报告进行审慎重新解读，因为尚不清楚这些动物是否可作为这一新描述物种的宿主。此外，重要的流行病学和临床实验室空白仍然存在：南美洲的 *Cytauxzoon* spp. 媒介尚未被最终证实，*Amblyomma sculptum* 被提出为推定媒介但实验上的媒介能力未确认；同时，关于 *C. brasiliensis* 感染家猫的潜在血液学影响的信息仍然匮乏。因此，本研究旨在回答三个核心问题：*C. brasiliensis* 是否发生在巴西家猫中；具有更强分辨力的分子标记能否确认其在家猫中的循环；感染是否伴有可检测的血液学改变。研究结果发表于《Veterinary Research Communications》。
**主要技术方法**
研究人员采用便利抽样，于2024年9月至2026年1月期间，从巴西里约热内卢州的兽医临床实验室收集了404份家猫残余血液样本，样本来源于该州大都市区（n=198）和南弗鲁米嫩塞区（n=206）。主要关键技术方法包括：（1）血液学分析：使用自动化血细胞分析仪和显微镜检查（瑞氏-吉姆萨染色）进行血细胞计数及形态学评估，估算寄生虫血症水平；（2）DNA提取与内源性基因验证：采用商业试剂盒提取DNA，并通过扩增 *GAPDH* 基因验证DNA质量；（3）基于18S rRNA基因的巢式PCR（约800 bp）对梨形虫目进行筛查，随后利用线粒体 cytB 基因（约1444 bp）进行 *Cytauxzoon* spp. 的分子特征化；（4）对阳性样本进行巴通体属、血支原体、无形体科及婴儿利什曼原虫恰加斯亚种的差异分子诊断；（5）对扩增产物进行Sanger测序，并进行BLASTn相似性分析、最大似然法系统发育分析（基于Kimura 2-参数模型或HKY+G+I模型，1000次自举检验）以及单倍型多样性分析（基于DnaSP和PopART软件）。
**研究结果**
**血涂片显微镜检查**
3只动物的血涂片中观察到红细胞内包涵体，形态学上与梨形虫相容，包括圆形至卵圆形的环状体、逗号状及四联体（马尔他十字）样结构。猫2的平均长度为3.0±0.7 μm，宽度为2.0±0.6 μm；猫3的平均长度为2.0±0.5 μm，宽度为2.0±0.4 μm。猫2的寄生虫血症水平估计为0.75%，猫3为2.05%。
**分子检测与序列分析**
所有样本均成功扩增内源性 *gapdh* 基因。在基于18S rRNA基因的分子筛查中，4份样本（约1%）检测到与 *Cytauxzoon* sp. 相容的梨形虫阳性，包括前述血涂片阳性的3只。所有阳性猫均为雄性、杂种；3只2岁，1只3岁。BLASTn分析显示，获得的18S rRNA序列与先前在巴西虎猫和豹猫中检测到的 *C. brasiliensis* 序列（如PP583821、PQ686812等）具有100%同源性；cytB 序列与在美洲狮、虎猫和豹猫中检测到的 *C. brasiliensis* 分离株（如PQ667868、PP588457等）具有97–99%同源性。
**单倍型与系统发育分析**
单倍型分析显示，18S rRNA数据集共鉴定出5种单倍型，其中Hap 1代表本研究样本；cytB基因表现出更高的单倍型数和更强的区分分离株能力，证实该标记对 *C. brasiliensis* 种内特征化的有用性。系统发育分析基于18S rRNA基因显示，本研究生成的序列聚于 *C. brasiliensis* 进化枝内，与巴西野生猫科动物分离株聚在一起；基于cytB基因的树进一步将本研究序列与先前描述的 *C. brasiliensis* 分离株以高统计支持度聚类，并揭示其与其它 *Cytauxzoon* 种之间一致的系统发育分离。聚类模式提示密切相关的 *C. brasiliensis* 谱系在巴西野生和家养猫科动物中循环。
**血液学发现**
4只阳性猫的血液学参数显示：所有动物均出现血小板减少；2只动物出现正细胞正色素非再生性贫血；猫2和猫3出现白细胞增多伴中性粒细胞增多和核左移；猫1出现白细胞减少和中性粒细胞减少；所有4只猫均出现淋巴细胞减少。此外，猫1出现中性粒细胞毒性变化（胞质嗜碱性及杜勒小体），猫3出现中性粒细胞毒性变化（胞质嗜碱性及环形核），并伴有明显黄疸。由于病例数量有限，这些发现仅作描述性解读，而非推断性结论。
**差异分子诊断**
对 *C. brasiliensis* 阳性样本进行的差异分子诊断中，未检测到巴通体属、柔膜纲（Mollicutes）成员、无形体科成员或婴儿利什曼原虫恰加斯亚种。
**讨论与结论**
讨论部分强调，本研究在家猫中检测到 *C. brasiliensis* 扩展了该梨形虫在巴西的流行病学知识。检测频率（约1%）与先前巴西家猫中的 *Cytauxzoon* spp. 报告一致，但回顾性设计和便利抽样限制了对流行率、风险因素和空间分布的推断。血涂片中观察到的低寄生虫血症水平（0.75%和2.05%）与先前报告相符，但与高至33%的病例存在差异。血液学改变（血小板减少、贫血、白细胞异常）部分类似于由 *C. felis* 引起的细胞虫病急性病例的表现，但研究者谨慎指出，缺乏对组织裂殖生殖的直接评估、样本量小、未系统检测猫免疫缺陷病毒（FIV）和猫白血病病毒（FeLV）等共感染/合并症，以及未评估血清胆红素和总血浆蛋白，限制了对直接致病性的归因。血小板减少的机制可能包括弥散性血管内凝血（DIC）或全身炎症继发的血小板消耗。未检测到其他血原虫降低了它们对血液学改变的贡献，但未测的合并症（如FIV/FeLV）仍可能为混杂因素。从流行病学角度看，家猫中鉴定 *C. brasiliensis* 支持该病原体在野生与家养猫科动物之间（尤其是在自然与人为环境交界区域）共享谱系的假说，但需更全面的生态和空间数据证实溢出事件。分子和系统发育分析再次证实使用线粒体标记（特别是cytB基因）对 *Cytauxzoon* 属分类特征化的重要性。单倍型网络仅作为探索性可视化，需更多样本和地理覆盖以验证遗传模式。
**结论翻译**
本研究记录了里约热内卢州家猫中 *C. brasiliensis* 的发生，并强调该寄生虫在巴西并非仅限于野生猫科动物。分子和系统发育分析支持该病原体的鉴定，尤其在考虑cytB基因时。尽管阳性猫表现出相关的血液学改变，但鉴于病例数量少及回顾性研究设计的固有局限性，应谨慎解读这些结果。尽管如此，本研究拓展了当前对巴西猫科动物中 *Cytauxzoon* 多样性的认识，并强调了需进一步研究其致病性、媒介能力以及家养与野生宿主之间的界面。
