《Biological Invasions》：Detection of bee-associated pathogens in different developmental stages within the nest of the invasive hornet Vespa velutina nigrithorax Buysson, 1905
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黄腿胡蜂（Vespa velutina nigrithorax，即亚洲大黄蜂）是欧洲入侵物种，通过捕食传粉昆虫尤其是西方蜜蜂（Apis mellifera）造成严重生态问题，并对养蜂业构成威胁。捕食行为可能在蜜蜂与胡蜂间传播病原体，促进环境中疾病扩散。本研究评
黄腿胡蜂（Vespa velutina nigrithorax，即亚洲大黄蜂）是欧洲入侵物种，通过捕食传粉昆虫尤其是西方蜜蜂（Apis mellifera）造成严重生态问题，并对养蜂业构成威胁。捕食行为可能在蜜蜂与胡蜂间传播病原体，促进环境中疾病扩散。本研究评估了采自葡萄牙Aveiro和Coimbra地区38个巢穴中不同发育阶段（幼虫、蛹、成虫及蚁后）的V. v. nigrithorax个体内西方蜜蜂及熊蜂相关病原体的流行率（prevalence）与丰度（abundance）。共分析534份样本，采用实时荧光定量PCR（qPCR）检测主要蜜蜂病原体。检出率最高且载量最大的病原体为畸形翅病毒（Deformed Wing Virus, DWV）（70.41%；4.66×1010拷贝），其次为Nosema ceranae（42.70%；6.17×106拷贝）、黑蜂巢病毒（Black Queen Cell Virus, BQCV）（44.76%；1.64×105拷贝）和慢性蜜蜂麻痹病毒（Chronic Bee Paralysis Virus, CBPV）（33.90%；2.17×109拷贝）。DWV及其他病原体在各发育阶段均有检出，表明巢内广泛存在病原体且可能存在多种暴露途径，包括可能的垂直传播（vertical transmission）。Aveiro地区巢穴中病原体负荷显著更高，可能与环境因素及巢成熟度有关。研究证实V. v. nigrithorax可携带多种具复制能力的蜜蜂相关病原体，引发对种间传播（interspecific transmission）的担忧。
论文解读：入侵胡蜂Vespa velutina nigrithorax巢内不同发育阶段中蜜蜂相关病原体的检测**
研究背景与意义
亚洲大黄蜂Vespa velutina nigrithorax（黄腿胡蜂）原产东南亚，2004年入侵欧洲并迅速扩散至葡萄牙，其成、幼虫主要以西方蜜蜂（Apis mellifera）为蛋白来源（占食谱>70%）。蜜蜂种群中高流行多种病原体，包括病毒［畸形翅病毒DWV、黑蜂巢病毒BQCV、慢性蜜蜂麻痹病毒CBPV、急性蜜蜂麻痹病毒ABPV、囊状幼虫病病毒SBV］、微孢子虫（Nosema ceranae）、锥体虫［Lotmaria passim、Crithidia mellificae、熊蜂源Crithidia bombi］及新簇虫（Apicystis bombi］。胡蜂捕食染病蜜蜂可能摄入病原体，既往零星研究报道成虫或单巢中检出DWV、BQCV、N. ceranae等，但缺乏多巢、多发育阶段系统性量化数据，垂直传播可能性亦未探明。明确胡蜂是否作为蜜蜂病原体的储存宿主（reservoir）或被动携带者（passive carrier），对评估入侵胡蜂加剧本地授粉昆虫病理风险至关重要。本研究于葡萄牙Aveiro与Coimbra采集38个巢，系统分析幼虫、蛹、工蜂成虫及蚁后中9类蜜蜂/熊蜂病原体的流行率、载量及病毒负链RNA（复制标志），探讨巢内传播模式及地理季节差异，论文发表于《Biological Invasions》。
主要技术方法
研究人员于2024年7月30日至11月21日在葡萄牙Aveiro（13巢）和Coimbra（25巢）采集未施药活跃巢共38个，取幼虫、蛹、成虫工蜂各尽量30头/巢，含3个巢的蚁后，总计534样本，-80℃保存。样本按发育阶段每5头混合（pool），95%乙醇表面消毒后，用Zymo试剂盒提取DNA（原虫、微孢子虫）和RNA（病毒）。以SYBR Green qPCR / 一步法RT-qPCR定量DWV、BQCV、CBPV、ABPV、SBV、N. ceranae、L. passim、C. mellificae、C. bombi、A. bombi，设阳性蜂蜜蜂核酸及阴性对照，制作标准曲线。对有病毒检出的池做链特异性（strand-specific）RT-PCR检测负链RNA判断复制。统计分析采用二项广义线性模型（GLM）及glmmTMB评估病原体种类、发育阶段、市镇及月份对流行率与log10转化载量的影响，含Tukey事后检验（α=0.05，R 4.4.2）。
研究结果
Results——总体检出情况
534份样本（幼虫175、蛹173、成虫183、蚁后3）均未检出KBV和C. mellificae。总体流行率由高到低：DWV 70.41%、BQCV 44.76%、N. ceranae42.70%、CBPV 33.90%、SBV、ABPV、L. passim、A. bombi、C. bombi较低。平均拷贝数（±SD）：DWV 4.66×1010±5.75×1011、CBPV 2.17×109±3.66×1010、SBV 1.41×107±2.23×108、N. ceranae6.17×106±…、BQCV 1.64×105±…。9种病原体均见于幼虫、蛹、成虫三阶段；3只蚁后检出DWV、CBPV、BQCV、SBV、C. bombi。所有病毒阳性样本均检出负链RNA，证实在胡蜂体内具复制活性。
Results——发育阶段与地理差异
剔除蚁后数据的GLM显示：病原体种类（χ2=1191.04, df=8, p<0.001）和市镇（χ2=32.82, df=3, p<0.001）对流行率有显著影响，发育阶段无显著影响；载量模型同样病原体种类（χ2=1079.58, df=3, p<0.001）和市镇（χ2=39.53, df=3, p<0.001）显著，发育阶段不显著。Aveiro地区流行率与载量均显著高于Coimbra和Lous?（p<0.05）；DWV流行率与载量均显著高于其他各病原体（p<0.05）。含蚁后的巢模型显示发育阶段间无差异，病原体种类差异显著，巢间载量有差异（巢23显著低于巢30）。
Results——空间分布热图
热图显示Aveiro市镇巢穴病原体（尤其DWV、N. ceranae）log10载量普遍高于Coimbra和Lous?，印证地理差异。
Results——季节性差异
按月分析显示：DWV流行率11月显著高于其他月，载量11月高于10月；BQCV流行率10月、11月较高，载量8月高于10月、11月；CBPV流行率10月高于9月；ABPV流行率8月较高；SBV流行率9月较高，载量8月、9月较高；N. ceranae载量11月高于10月。说明病原体动态随胡蜂巢周期（夏末秋初大量捕食、秋末产生繁殖蚁）及蜜蜂群内季节消长而变。
讨论与结论总结
研究人员发现V. v. nigrithorax幼虫、蛹、工蜂成虫及蚁后中广泛存在具复制能力的西方蜜蜂与熊蜂病原体，DWV流行率与载量最高。各发育阶段无显著差异提示巢内存在水平传播（horizontal transmission，通过污染食物、接触、共享花朵）及可能的垂直传播（从感染蚁后至子代），后者获3只蚁后阳性支持但未定量验证。Aveiro较高负荷归因于采样偏晚（多为成熟次级巢）、环境植被少致蜜蜂为主要猎物、巢密度大增加捕食染病蜂概率。季节峰值与蜜蜂群内病原体秋季累积及胡蜂秋末强捕食期吻合，支持摄食染病蜜蜂为主要感染途径。所有病毒检出负链RNA证明胡蜂为允许性溢出宿主（permissive spillover host）而非单纯机械载体，但其能否作为反向传播的回溢储存宿主（spillback reservoir）尚待传播实验证实。研究建议早期移除近养蜂场巢穴以降低病原体循环放大风险。论文结论指出：病原体贯穿巢内各阶段含蚁后，strand-specific RT-PCR证实病毒在胡蜂体内主动复制（productive infection），符合多种巢内暴露途径；V. v. nigrithorax可作为多种蜜蜂关联病毒的生物学允许性溢出宿主，潜在回溢储存作用需进一步验证；巢可季节性积累病原体，持续监测与综合防治对减轻入侵种病理风险必要。
