巴基斯坦某三级医院重症监护病房分离的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌中blaOXA-23基因的检出

《MicrobiologyOpen》：Detection of OXA-23 Among Carbapenem-Resistant Acinetobacter baumannii Isolated From Intensive Care Units of a Tertiary Care Hospital in Pakistan

　　

摘要：耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（Carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii，CRAB）被世界卫生组织列为最高优先级关键病原体，美国疾病预防控制中心亦将其归类为严重且紧迫的公共卫生威胁。本研究为横断面研究，旨在检测从重症监护病房临床标本中分离的耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌中blaOXA-23基因的存在情况。研究于2024年1月至12月在巴基斯坦开伯尔医科大学病理学及诊断医学研究所微生物学系开展。经表型确认为耐碳青霉烯的鲍曼不动杆菌分离株先通过blaOXA-51基因检测进行基因型验证，随后采用聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）筛查blaOXA-23基因，并对blaOXA-23上游ISAba1插入序列进行PCR定位扩增。结果显示，52株（100%）分离株均检出带有上游ISAba1插入的blaOXA-23基因。序列分型（Multilocus Sequence Typing，MLST）显示ST19为最常见序列型，占31株（59.6%），其次为ST2占14株（26.9%）、ST1占7株（13.4%）。上述发现强调在高危ICU环境中实施针对性感染控制措施及开展常规耐药基因监测筛查的重要性，以遏制进一步传播。

巴基斯坦三级医院ICU耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌中bla_OXA-23基因检出的研究解读

鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii）是重症监护病房（Intensive Care Unit，ICU）重要的院内感染病原菌，尤其易在免疫功能低下及机械通气患者中引起呼吸机相关性肺炎、血流感染及伤口感染。该菌可通过获得外源耐药基因迅速产生多重耐药，其中耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌（Carbapenem-resistant A. baumannii，CRAB）因几乎无有效β-内酰胺类药物可用，被WHO列为急需开发新药的危急优先级病原体。CRAB对碳青霉烯类的耐药主要由D类碳青霉烯酶——OXA型β-内酰胺酶介导，尤其是获得性bla_OXA-23基因在全球CRAB中广泛流行，且常受上游ISAba1插入序列启动而高表达。明确特定区域CRAB临床分离株中bla_OXA-23及其上游ISAba1的携带状况、克隆谱系分布，对制定本地化感控策略及抗菌药物管理具有重要意义。本研究由Hafsa Waseem等研究人员开展，收集巴基斯坦某三级医院ICU来源CRAB分离株进行表型确证、种特异性bla_OXA-51基因型鉴定、bla_OXA-23及ISAba1–bla_OXA-23上游结构PCR检测、七位点多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing，MLST，Pasteur方案），结论显示所有52株CRAB均携带带ISAba1上游插入的bla_OXA-23，优势克隆为ST19（CC1/IC1变异株），次为ST2（IC2全球流行克隆）和ST1（IC1原型），提示高度克隆性传播及严峻耐药形势，需强化ICU靶向感控与监测。本文发表于《MicrobiologyOpen》。

研究人员采用以下主要关键技术方法开展研究：收集2024年1月—12月巴基斯坦某三级医院ICU患者不同临床标本（脓液、血液、支气管肺泡灌洗液BAL、组织、痰液、体液、导尿管尿等）中非重复表型耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌分离株，按CLSI 2024标准行纸片扩散法与肉汤微量稀释法确证碳青霉烯耐药并排除同一患者重复株；VITEK 2（20NE卡）及生化学试验初鉴至种水平；采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA，以种特异bla_OXA-51引物PCR确认鲍曼不动杆菌；对确认株行bla_OXA-23特异引物PCR扩增；以ISAba1上游引物与bla_OXA-23下游引物做PCR mapping确认ISAba1插入于bla_OXA-23上游；对全部52株行MLST（cpn60-fusA-gltA-pyrG-recA-rplB-rpoB七位点，Pasteur scheme）并登录数据库比对分配序列型（Sequence Type，ST）。

3 Results

研究人员对52株表型CRAB经bla_OXA-51PCR验证均为鲍曼不动杆菌并纳入分析。标本来源以脓液和BAL各14株（26.9%）居多，其次为组织11株（21.1%）、血5株（9.6%）、痰及体液各3株（5.7%）、尿2株（3.8%）。科室分布：内科ICU 26株（52%）、外科ICU 23株（44.2%）、新生儿ICU 3株（5.76%）。药敏结果显示全部菌株对头孢地罗（Cefiderocol）和黏菌素（Colistin）100%敏感，替加环素（Tigecycline）敏感率67.3%，米诺环素（Minocycline）90.3%，多西环素（Doxycycline）50%；对左氧氟沙星（Levofloxacin）仅1株敏感，其余常用β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药率≥92.3%—100%。bla_OXA-23基因在52株（100%）中检出阳性；MLST分型得ST19共31株（59.6%，CC1内IC1谱系变异株）、ST2共14株（26.9%，CC2对应国际克隆2 International Clone II，IC2）、ST1共7株（13.4%，CC1对应国际克隆1 IC1原型）。ISAba1–bla_OXA-23上游PCR mapping显示全部52株（100%）均存在ISAba1插入于bla_OXA-23上游，提示其高表达驱动碳青霉烯耐药。

4 Discussion

研究人员指出本研究中bla_OXA-23在CRAB中检出率达100%，与巴基斯坦本地及南亚、中东多项报道（94%—99%）接近，显著高于欧美部分地区（美52.2%、欧80.5%），差异可能与本地区抗生素滥用、ICU超负荷、感控薄弱致克隆播散有关，而高收入国家完善抗菌药管理（Antimicrobial Stewardship，AMS）与主动监测限制了其传播。全株携带ISAba1上游插入可增强bla_OXA-23转录，加重碳青霉烯失效。ST19为当地优势流行克隆（CC1分支），ST2（IC2）次之，反映国际流行克隆与本地特有克隆共存。研究局限性为非概率连续抽样，结果仅反映所收集分离株分子特征，不代表人群总体流行率。

5 Conclusion

结论：本研究证实巴基斯坦某三级教学医院ICU来源的52株耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌均携带上游插入ISAba1的bla_OXA-23基因，且ST19为最主要序列型，凸显高危ICU内需推行常规耐药基因PCR筛查及针对性感染控制举措以阻断进一步克隆传播。