常规免疫分析仪用于干血斑和体积微量采样（Capitainer B50）中TSH测量的适配：成人甲状腺功能检测的评估

《Practical Laboratory Medicine》：Adaptation of a routine immunoassay analyser for TSH measurement in dried blood spot and volumetric microsampling (Capitainer B50): evaluation for thyroid function testing in adults

　　

背景：促甲状腺激素（TSH）是诊断和监测甲状腺疾病的主要生物标志物。尽管血清仍是参考基质，但微量采样方法，包括干血斑（DBS）和体积微量采样装置（Capitainer B50，简称CPT B50），可提高检测可及性和患者依从性。本研究评估了从DBS和CPT B50测量TSH与血清相比的分析性能和临床性能。

方法：从246名接受甲状腺评估的成人中收集配对血清、DBS和CPT B50样本。DBS和CPT B50样本经洗脱后，使用化学发光免疫分析（RUO，LIAISON? XL，DiaSorin）进行分析。评估了分析性能、回收率、重复性、稳定性和方法一致性。采用逆Passing–Bablok回归方程将微量样本结果转换为血清等效浓度。性能评估采用Passing–Bablok回归和Bland–Altman分析，预定义接受标准为偏倚≤±15%、变异系数（CV）≤15%、回收率85%–115%，遵循CLSI EP15-A3和EP17-A2指南。

结果：重复性CV范围为3.7%至10.4%，回收率为97%–110%。DBS和CPT B50与血清表现出强一致性，CPT B50的平均偏倚为?0.10 mIU/L，DBS为0.24 mIU/L。样本在+4?°C和?20?°C下稳定长达8周。甲状腺状态分类准确率：DBS为96%，CPT B50为98%。

结论：从DBS和CPT B50测量TSH与血清表现出高度的分析和临床一致性。体积采样提高了重复性和稳定性，支持其用于远程甲状腺检测和治疗监测。

**论文解读：基于干血斑与体积微量采样的TSH检测在甲状腺功能评估中的分析及临床验证**

**研究背景与问题**
甲状腺疾病是全球最常见的内分泌疾病，其中亚临床甲状腺功能减退症影响高达15%的成年人群，显性甲状腺功能减退症约0.8%，甲状腺功能亢进症在欧洲约0.8%、美国约1.2%。准确诊断与有效监测依赖于血清中促甲状腺激素（TSH）及游离甲状腺素（fT₄）的测定。血清TSH检测虽为金标准，但易受异嗜性抗体、巨TSH、生物素等干扰，且静脉采血可能影响检测可及性与患者依从性。尽管液相色谱-串联质谱（LC–MS/MS）具有高特异性，但技术复杂且不适用于常规临床实验室。因此，开发微创、便于居家采集的替代采样方法具有重要临床意义。干血斑（DBS）采样具有分析物运输稳定、样本量低等优势，但预分析因素（如血细胞比容效应、干燥不完全）可能影响准确性。体积微量采样装置Capitainer B50（CPT B50）可固定采集50 μL毛细血管血，有望减少采样体积变异。然而，上述方法在成人甲状腺功能检测中的系统验证仍不充分。为此，研究人员开展本研究，旨在评估并验证基于DBS和CPT B50的TSH检测在常规免疫分析平台（LIAISON? XL，DiaSorin）上的分析性能与临床诊断一致性，并与血清结果进行比较。

**研究内容与意义**
该研究纳入246名成人参与者（年龄18–75岁），收集配对血清、DBS及CPT B50样本（其中219人提供DBS，83人提供CPT B50）。采用化学发光免疫分析测定TSH，通过逆Passing–Bablok回归将微量样本结果转换为血清等效浓度，并以血清为参比，评估分析性能（重复性、回收率、稳定性）、方法一致性（Passing–Bablok回归、Bland–Altman分析）及临床分类准确性（依据血清参考区间0.3–3.6 mIU/L）。结果表明，DBS和CPT B50与血清高度一致，分类准确率分别达96%与98%，体积采样（CPT B50）的重复性优于传统DBS。该研究证实了微创采样用于甲状腺疾病远程监测的可行性，为患者自采样与资源有限环境下的激素检测提供了可靠替代方案。论文发表在《Practical Laboratory Medicine》。

**关键技术方法**（不超过250字）
研究样本来源于246名成人，其中219人提供传统DBS（Ahlstrom TFN卡），83人提供CPT B50（Capitainer B50装置）。样本经磷酸盐缓冲液（含0.05% Tween-20）洗脱后，采用化学发光免疫分析（RUO，LIAISON? XL，DiaSorin）测定TSH，校准追溯至WHO第3次国际标准（IRP 81/565）。通过逆Passing–Bablok回归建立转换方程：TSH_血清 = (TSH_CPT ? 0.0025) / 0.0659 及 TSH_血清 = (TSH_DBS ? 0.0080) / 0.0199。性能评估依据CLSI EP15-A3和EP17-A2指南，预设接受标准为偏倚≤±15%、CV≤15%、回收率85%–115%。采用Passing–Bablok回归与Bland–Altman分析评价方法一致性，并依据回归推导的参考区间（0.3–3.6 mIU/L转移为DBS: 0.40–3.47 mIU/L；CPT B50: 0.26–3.53 mIU/L）评估甲状腺状态分类准确性。

**研究结果**（保留每个小标题）

**3.1 分析性能（Analytical performance）**
通过两个对照样本的批内与批间精密度研究，变异系数（CV）均低于8%（批内）和10%（批间），满足预设的CV≤15%标准。回收率范围为91%–108%，在DBS和CPT B50两种基质中一致。

**3.2 与血清的方法比较（Method comparison with serum）**
Passing–Bablok回归分析显示，血清等效后的微量样本TSH浓度与血清结果高度一致。CPT B50的平均相对偏倚为+1.2%，DBS为+9.2%，均在±15%接受范围内。绝对Bland–Altman分析显示CPT B50的平均偏倚为?0.10 mIU/L（一致性限?5.04至4.83 mIU/L），DBS为0.24 mIU/L（一致性限?2.37至2.85 mIU/L）。

**3.3 预分析因素（Pre-analytical factors）**
未干燥的DBS卡在室温或4?°C下过夜储存，导致TSH浓度大幅下降约45%，可能源于蛋白酶活性或血液成分重新分布，表现为卡片上可见的“光晕效应”。此外，有意或意外暴露于UV-C辐射（如消毒过程）会导致TSH降解，即使卡片已充分干燥也不可避免。

**3.4 样本稳定性（Sample stability）**
在+4?°C和?20?°C条件下，DBS和CPT B50样本的TSH浓度在8周内保持稳定（>95%基线值）。25?°C下前4周稳定，之后逐渐下降。37?°C并暴露于阳光直射时，2周后回收率降至90%以下。结果表明适当干燥与低温储存对确保远程检测的样本完整性至关重要。

**3.5 与DBS相关的参数（DBS-related parameters）**
血斑体积（20–80 μL）和血斑内分布（“火山效应”）对TSH浓度无显著影响。血细胞比容（Hct）轻度影响TSH浓度（TSH仅存在于血清中，Hct升高时相对血清量减少），但偏差始终在Capiau等(2019)所设接受限内，且未出现一致上升或下降趋势。

**3.6 参考区间转移（Reference interval transfer）**
基于Passing–Bablok回归将血清参考区间（0.3–3.6 mIU/L）转移至DBS（0.40–3.47 mIU/L）和CPT B50（0.26–3.53 mIU/L），与已发表文献一致。

**3.7 分类准确性（Classification accuracy）**
DBS对甲状腺功能亢进的敏感性为85.2%、特异性为98.9%；对甲状腺功能减退的敏感性为93.3%、特异性为96.8%。CPT B50的分类准确率为98%，进一步支持其临床适用性。

**讨论与结论**
讨论部分总结了DBS与CPT B50检测TSH在LIAISON XL平台上的全面验证结果，确认其分析性能与血清高度一致。体积采样（CPT B50）通过控制采样体积减少了血细胞比容相关变异，重复性优于传统DBS（CV≤10% vs ≤15%）。预分析因素（如未干燥、UV-C暴露）显著影响结果，强调了规范操作的重要性。稳定性研究证实冷藏或冷冻条件下8周内无显著降解，而高温和阳光直射导致分析物损失。方法特异性参考区间已建立，临床验证显示分类准确度超过95%。局限性包括：所有参与者血细胞比容在性别特异性参考范围内，未评估极端Hct（如贫血或红细胞增多症）；仅测试50 μL体积装置；毛细血管血与静脉血配对比较未进行。总体而言，DBS和CPT B50作为血清TSH检测的替代方案可靠，适用于远程监测和患者自采样。

**研究结论（翻译）**：在LIAISON? XL平台上，从DBS和体积微量采样装置（CPT B50）测量TSH是血清检测的可靠替代方案，具有强一致性、稳健的分析性能和优异的临床性能。这些微创方法适用于甲状腺疾病的常规监测，包括甲状腺素剂量调整，并为远程或资源有限环境提供实用优势。