《Clinica Chimica Acta》：Assay-specific reference intervals and evaluation of key preanalytical factors for C-terminal agrin fragment measured using the Abcam ab216945 ELISA
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•在肝素锂（Li-heparin）血浆中建立了CAF的参考区间。•CAF在常规实验室条件下表现出整体稳定性。•在血浆中储存于-20°C环境下超过30天后，其稳定性会受到影响。•矩阵比较显示肝素锂（Li-heparin）和钾乙二胺四乙酸（K-EDTA）之间存在潜在的非线性偏差。引言
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在肝素锂（Li-heparin）血浆中建立了CAF的参考区间。
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CAF在常规实验室条件下表现出整体稳定性。
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在血浆中储存于-20°C环境下超过30天后，其稳定性会受到影响。
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矩阵比较显示肝素锂（Li-heparin）和钾乙二胺四乙酸（K-EDTA）之间存在潜在的非线性偏差。
引言
Agrin是一种由AGRN基因编码的大型肝素硫酸多糖蛋白聚糖[1]，主要存在于骨骼肌的基底膜和神经肌肉接头（NMJ）中，尽管它也存在于大脑和肾脏中。Agrin是一种对NMJ形成[2]和维持[3]至关重要的神经来源的组织因子。它与低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4）结合，激活肌肉特异性激酶（MuSK），并启动负责神经肌肉终板处乙酰胆碱受体（AChR）聚集和突触后稳定的信号级联反应[4]。突触间隙中的Agrin受丝氨酸蛋白酶神经酪蛋白酶[5]的调节[6]。神经酪蛋白酶能够切割Agrin，产生C末端片段（CAF），在α位点切割生成110 kDa的CAF110片段，在β位点切割生成90 kDa和22 kDa的CAF22片段[5]。这两种片段都可以在血液循环中检测到。
多项研究探讨了循环中的CAF或CAF22作为生物标志物的潜在作用。循环中CAF浓度升高与肌肉质量减少[7]、体力表现下降、衰老和慢性疾病状态有关，表明CAF可能是肌肉减少症、虚弱和神经肌肉退化的有希望的标志物[8][9][10]。CAF与体育锻炼之间的关系尚不明确，CAF可能对肌肉功能或质量的变化比对绝对数量的变化更敏感[11]。此外，CAF22可以通过肾脏清除[12]，是肾功能下降的快速指标[13]，并且在肾移植后似乎比肌酐和Cystatin C恢复得更快[14]。
在过去的十年中，多项研究应用了针对CAF的不同抗体，并主要使用Western blotting和ELISA方法来量化血清或钾乙二胺四乙酸（K-EDTA）血浆中的CAF浓度。然而，由于方法学的变异性和检测标准化的不完全，研究之间的可比性有限，这至少部分解释了健康对照组中报告的不同CAF浓度。虽然存在基于小规模研究人群得出的血清参考值[14]，但已经发布了K-EDTA血浆中CAF值的全面参考区间[15]。后者表明，在健康成人中，年龄与K-EDTA血浆CAF水平之间存在轻微的正相关性。
尽管临床对CAF的兴趣日益增加，但分析前因素仍缺乏充分研究。现有的稳定性信息主要来自制造商的数据，而独立的稳定性评估非常少。样本基质之间的潜在差异尚未得到系统研究。尽管有几种商用检测方法可用于测定CAF，但由于缺乏直接比较研究、国际公认的参考物质和外部质量评估程序，不同检测方法之间的可比性仍然很大程度上未知。
本研究确定了健康成人肝素锂（Li-heparin）血浆中CAF的参考区间，研究了影响CAF测量的关键分析前因素，并比较了K-EDTA和肝素锂血浆，旨在支持临床应用并提高分析可比性。
小节片段
材料与方法
本研究在丹麦奥胡斯大学医院的临床生物化学系进行，该部门通过了DS/EN ISO 15189:2022认证。
分析性能
本研究分析的所有血浆样本均来自2025年2月至2025年9月期间。每次分析都包含了两个专门设计的血浆质量控制池（高浓度和低浓度），以监测研究期间的分析间变异和潜在的系统分析漂移。在此时间范围内，高浓度（7198.4 pg/mL，n=21）和低浓度（5105.6 pg/mL，n=24）质量控制的实验室内部精密度（CV%）分别为8.1%和8.2%，且在整个研究期间CV保持稳定。
讨论
人们越来越关注将CAF作为生物标志物使用，但关于参考值的数据有限，且尚未发表稳定性数据。在这项研究中，我们探讨了影响肝素锂血浆样本中CAF稳定性的多个分析前因素，建立了肝素锂血浆的参考区间，并将其与K-EDTA血浆样本进行了比较。
本研究估计了22-73岁成年人肝素锂血浆中CAF浓度的95%参考区间为2917.5至
手稿准备过程中生成式AI和AI辅助技术的声明
在准备这项工作时，作者使用了ChatGPT（OpenAI）来协助语言编辑。使用该工具后，作者根据需要进行内容审查和编辑，并对 published 文章的内容负全责。
CRediT作者贡献声明
Jacob Rudjord Therkildsen：撰写——原始草稿、可视化、软件、方法学、概念化。Cindy S?nders? Knudsen：撰写——审稿与编辑、项目管理、方法学、研究、概念化。Jesper Helbo Storgaard：撰写——审稿与编辑、方法学、研究、概念化。Henning Andersen：撰写——审稿与编辑、监督、方法学、研究、概念化。Tina Parkner：撰写——审稿与编辑，
