剖析 FLNA 切割与信号传导在介导神经内分泌肿瘤中 Calpeptin 效应的作用

《Cell Communication and Signaling》：Dissecting the role of FLNA cleavage and signaling in mediating calpeptin effects in neuroendocrine tumors

摘要

背景

神经内分泌肿瘤（NETs）是罕见的恶性肿瘤，其发病率正在上升且临床行为具有异质性，给诊断和治疗带来了重大挑战。对新型治疗策略的迫切需求日益明显。丝切蛋白 A（FLNA）是一种参与癌症进展和炎症信号的细胞骨架蛋白，它被钙蛋白酶切割产生 90 kDa C 末端片段（FLNA^CT），其在 NETs 中的功能作用尚不清楚。钙蛋白酶抑制剂卡培肽（calpeptin）可阻止 FLNA 的切割。

方法

本研究利用 Western 印迹、RNA 测序、功能检测和患者来源的 NET 类器官模型，调查了 FLNA 切割在 NET 进展中的作用以及卡培肽的效果。

结果

我们发现 NET 细胞同时表达全长 FLNA 和 FLNA^CT，且两者均定位于细胞质。卡培肽降低了 FLNA^CT 的表达，并抑制了 NET 模型中的增殖和活力。其对细胞迁移的抑制作用仅在 H727 细胞中观察到。RNA 测序鉴定出许多受卡培肽调节的基因。比较 QGP-1 和 H727 细胞中变化最显著的前 500 个基因，我们鉴定出 115 个基因一致下调，148 个基因上调。其中，CEACAM5、CDC6 和 EGR1 在 QGP1 中受 FLNA 沉默影响，而 CCNE1、CDC6、ATF3 和 EGR1 在 H727 中受到影响。KEGG 通路分析突显了 QGP-1 细胞中的细胞因子–细胞因子受体相互作用，H727 细胞中的细胞周期调节，以及两种模型中的 TGF-β 信号传导。卡培肽在两种细胞系中均下调了 TGFBR2 和 TGFB3，且 FLNA 仅介导了 H727 细胞中的这一效应。此外，它在 QGP1 中降低了 IL5RA，在 H727 中降低了 IL17RB，且 FLNA 的参与仅限于 H727 细胞。表达耐钙蛋白酶切割的 FLNA 突变体表明，仅抑制 FLNA 切割并不能完全重现卡培肽的大多数转录效应。在患者来源的 NET 类器官中，卡培肽降低了活力并阻滞了类器官生长，而未诱导半胱天冬酶 -3/7 活性显著增加，这支持其主要为细胞静止作用而非促凋亡作用。

结论

这些发现突显了钙蛋白酶活性、FLNA 功能与 FLNA 蛋白水解在 NETs 中的复杂相互作用，并支持进一步临床前研究钙蛋白酶抑制作为潜在治疗方法的可行性。