达格列净的抗蛋白尿效应减轻亚临床急性肾损伤动物模型中小管-间质损伤的发生发展

《Frontiers in Pharmacology》：Antiproteinuric effect of dapagliflozin attenuates tubule-interstitial injury development in subclinical acute kidney injury animal model

引言：亚临床急性肾损伤（subAKI）以肾小管损伤标志物升高而肾小球功能无显著改变为特征，与急性肾损伤（AKI）及慢性肾脏病（CKD）进展相关。达格列净（dapagliflozin）在多种肾脏病模型中显示保护作用，但其对subAKI的影响及机制尚不清楚。既往结果提示达格列净对近端小管上皮细胞（PTECs）的作用可能涉及蛋白O-GlcNAcylation修饰。 方法：雄性BALB/c小鼠（6–8周龄）分为对照组（CTL）、subAKI组、subAKI+达格列净组、达格列净单药组。subAKI模型通过连续7天白蛋白过载诱导，治疗组经口灌胃达格列净（1.0 mg/kg/天）。评估肾结构与功能参数，并在LLC-PK1细胞中进行体外实验。 结果：各组肾小球结构与功能均保留。subAKI组出现白蛋白尿、尿β2-微球蛋白排泄增加及KIM-1表达升高，达格列净治疗均减轻上述改变，并恢复肾皮质白蛋白-FITC摄取。体外实验中，达格列净预防高白蛋白（20 mg/mL）诱导的LLC-PK1细胞白蛋白-FITC摄取降低。(Na++K+)ATPase活性与α1亚基表达在subAKI及subAKI+达格列净组下降。肾皮质中OGT表达与总蛋白O-GlcNAcylation在subAKI组升高，达格列净显著减弱该升高。 结论：达格列净对subAKI中小管-间质损伤发展的保护效应与恢复总蛋白O-GlcNAcylation平衡相关，从而贡献其抗蛋白尿作用，提示达格列净可作为subAKI治疗的潜在选择。

研究背景：肾脏疾病是全球公共卫生负担，其进展常具隐匿性，易由急性肾损伤（AKI）向慢性肾脏病（CKD）演化。传统AKI诊断依赖血浆肌酐上升或尿量下降，但因肾脏功能储备（RFR），肾小球功能明显衰退前已超过50%肾单位受损，故亚临床急性肾损伤（subAKI）被提出——以肾小管结构性或细胞性损伤标志阳性而肾小球滤过功能参数正常为定义。subAKI是AKI与CKI进展的风险因素，其核心机制为近端小管上皮细胞（PTECs）megalin介导的白蛋白内吞减少，引发促炎表型与小管-间质损伤（TII）及管性白蛋白尿。SGLT2抑制剂达格列净（dapagliflozin）在DAPA-CKD等试验中展现降低蛋白尿与肾心事件风险作用，但抗蛋白尿机制未明。研究人员前期发现达格列净可调节PTECs中总蛋白O-GlcNAcylation（一种丝苏氨酸可逆糖基化修饰，由O-GlcNAc转移酶OGT添加、O-GlcNAcase OGA去除），且在高血压大鼠中PTECs O-GlcNAcylation升高伴随白蛋白重吸收减少与TII加重，故假设达格列净通过调控O-GlcNAcylation改善subAKI。

本研究发表于《Frontiers in Pharmacology》，研究人员以白蛋白过载7天建立小鼠subAKI模型，设CTL、subAKI、subAKI+达格列净（1 mg/kg/天灌胃）、达格列净单药四组，同步在LLC-PK1猪PTECs系中以高白蛋白（20 mg/mL）模拟过载，并用OSMI-1抑制OGT；通过代谢笼收集24 h尿、心脏穿刺取血评估肾功能，皮质白蛋白-FITC体内摄取、体外荧光摄取测内吞，Western blot测O-GlcNAc/OGT/OGA/(Na⁺+K⁺)ATPase α1，酶活性法测ATPase，PAS与天狼星红染色及半定量评分评TII，免疫印迹测尿β2-微球蛋白与KIM-1，Pearson相关分析变量关联。

研究结果：3.1 达格列净减轻subAKI小鼠TII——subAKI组皮质间质腔、间质细胞数、小管损伤评分、胶原沉积、尿β2M、皮质KIM-1均升，达格列净同治疗逆转之；肾小球面积/细胞数/血浆肌酐/eGFR无组间差（单药组肾小球细胞数略增）。3.2 达格列净减轻subAKI蛋白尿与白蛋白尿——subAKI组24 h尿蛋白、UPCr、UACr、白蛋白清除率、FE_albumin、SDS-PAGE低中分子带、尿白蛋白免疫印迹均升，体内白蛋白-FITC摄取降；达格列净同治疗全部回逆；LLC-PK1中高白蛋白抑摄取，加5 μM达格列净阻断该抑效；FE_albumin与摄取负相关、与UACr正相关，24 h尿蛋白与小管损伤评分正相关。葡萄糖处理上，达格列净组及联合组尿糖/糖清除/FE_glucose预期升高；钠处理上，subAKI各组尿钠/FE_Na升、净钠平衡及皮质(Na⁺+K⁺)ATPase活性/α1表达降，达格列净不改钠相关参数，提示其选择性恢复蛋白重吸收而非钠重吸收。3.3 皮质总蛋白O-GlcNAcylation受达格列净调节——subAKI组总O-GlcNAc与OGT升、OGA不变，达格列净同治疗降总O-GlcNAc与OGT至低于CTL；LLC-PK1中高白蛋白升O-GlcNAc并抑摄取，OGT抑制剂OSMI-1（35 μM）模拟达格列净效应，证明OGT依赖通路参与。

讨论与结论翻译：subAKI属识别不足、治疗选项有限的综合征。本研究示同时给予达格列净于subAKI诱导期可减轻TII，伴皮质蛋白O-GlcNAcylation下调与抗蛋白尿效应。虽不能排除对肾小球滤过影响，但体内外证据指向PTECs受体介导内吞恢复为核心：megalin等可能受O-GlcNAcylation调控，达格列净经降OGT表达复衡O-GlcNAc，解除高白蛋白对内吞机器抑制。讨论亦指本研究限用雄性小鼠、未评性別差异，且SGLT2非依赖途径（如直接胞内信号）不能完全排除。结论原文意译：达格列净对subAKI中小管-间质损伤发展的保护效应关联于总蛋白O-GlcNAcylation平衡的重建，从而促成其抗蛋白尿效应，结果表明达格列净可成为subAKI治疗的潜在替代方案。