RNAi研究相关的产品介绍之一[选购宝典]

　

　

在后基因组时代，光有序列已经远远不够了，在基因专利、药物开发等巨大利益的推动下，基因功能的研究以前所未有的速度快速发展，各种研究基因功能的新技术不断涌现。RNAi作为一种新的、强有力的研究工具在功能基因组学领域的巨大应用潜力，使得RNAi成为当今研究领域最引人注意的话题之一。     一种新技术，就是能使过去做不到或者很难做到的工作变得简单可行，从而为研究人员开拓更广的空间，加速推动研究的进程。正如每一种新技术刚刚出现的时候，这种技术的每一步进展，乃至每一个应用成果都格外引人瞩目。由于RNAi可以非常简单地代替基因敲除制备基因缺失表型的个体，从而研究某个基因的功能，并且可以大规模的开展研究，在世界各地，越来越多的研究人员开始迫不及待地开展研究RNAi或者在自己的研究领域使用这项崭新的技术，而且确实涌现了一批相当出色的研究成果。     siRNA技术不要求大型的仪器设备，操作也非常简单，经费不够宽裕的实验室也能掌握，更重要的是潜力巨大，“钱”景诱人（——要知道，必需了解基因的基本功能才能注册基因专利，一个基因专利，价高的可达数亿美金——而RNAi正是研究基因功能的有力工具！），国内有不少实验室都开始关注这个技术。关键的问题就是：如何得到以及如何设计siRNA或者双链RNA呢？如何将这些双链RNA引入细胞呢？在这里，生物通进一步为有意开展RNAi技术的用户介绍在研究中可能用到的一些产品技术细节和相关信息。 　 siRNAs/dsRNA的来源 现成的siRNAs     可以简单、有效而且是特异的下调哺乳动物细胞中的基因的表达，这种能力使得siRNA在科研、治疗乃至商业上有巨大的前景。由于siRNA技术越来越多地应用在研发中，研究人员需要大量的、经济的siRNA以满足研究大量基因的需要。Qiagen公司推出Cancer siRNA Oligo Set Version 1.0，这是第一个针对疾病——139个人类癌症相关基因的siRNA Set，试剂盒为这139个基因中的每个基因提供2对精心设计的siRNAs以及一个正对照，5个负对照和4个荧光对照，以便让用户有更好的选择。这些siRNAs经过研究人员精心设计以增强引发基因沉默的能力，经专利的TOM-amidite化学法合成、HPLC纯化，纯度97%以上，可以同时或者分别诱发多个癌症相关基因的沉默，是对这139个人类癌症相关基因进行功能基因组学研究的有力工具，还可以用于研究这些癌症相关基因和其他更多基因的相互作用。 Cancer-related genes in the Cancer siRNA Oligo Set Version 1.0 ABCB1 ABCB4 ABCC1 ABL AKAP13 AKT1 AKT2 APC AR ATM BAD BAG1 BAK1 BARD1 BAX BCL2 BCL3 BCL6 BCR BRAF BRCA1 BRCA2 CBL CCND1 CCNE1 CDH1 CDH13 CDK4 CDKN1A CDKN1B CDKN1C CDKN2A CDKN3 CHEK1 CHEK2 CRK CSF1R DCC DEK EEF1A2 EGFR EIF3S3 EIF4E ELK1 EPHA1 ERBB2 ERBB3 ERBB4 ERG ESR1 ETS1 ETS2 FES FGF3 FGF4 FGF6 FGFR1 FGFR2 FGR FLI1 FOS FYN GADD45A GADD45B GADD45G GLI GNAI2 GRO1 HCC-4 HCK HRAS JUN JUND KAI1 KIT KRAS2 LCK MADH2 MADH4 MAF MAFF MAS1 MAX MCF2 MDM2 MEL MEN1 MET MLH1 MOS MPL 　 MSH2 MYB MYB1 MYC MYCL1 MYCN NCOA1 NCOA3 NET1 NF1 NF2 NFKB2 NRAS NTRK1 PAX2 PDGFB PGR PIM1 PTCH PTEN RAF1 RARA RB1 REL RET ROS1 RPS6KB1 RUNX1 SAS SKI SRC TAL1 TGFBR1 TGFBR2 THRA TIAM1 TLX1 TNFRSF1B TNFRSF6 TP53 VAV1 VHL WNT1 WNT2 WNT5A WNT7B WT1 YES1     Ambion公司也提供多个常见的已知基因的可以直接购买的现成siRNAs。例如GAPDH, c-myc, cyclophilin的siRNAs。 　 化学法合成siRNA：     在较早的哺乳动物RNAi实验中，siRNAs是通过化学方法合成的，就像合成引物一样，这种方法比较简单明确。号称The Company of RNA的Ambion公司就有提供此项服务。只要你提供序列，Ambion就可以帮你合成两条互补的RNA单链，末端补加TT或者UU，或者其他你需要的3’突出端。同时还免费提供去保护和反向脱盐纯化、PAGE胶纯化等服务。一对冻干的RNA连同退火Buffer、无RNAse水一起提供，方便实验的进行。     QIAGEN公司，前不久刚吞并了全球最大的DNA合成供应商Operon公司和RNA合成供应商Xeragon公司，凭借Xeragon在RNA合成领域的雄厚实力和声望，提供siRNA合成服务。专利的TOM-amidited技术，使得每一步碱基耦联效率高达99.5%以上，有更高的产率。一对21碱基的RNA退火形成3’端带有2个碱基突出的双链RNA，经过去保护和脱盐，纯度为80%-85%，如果选择阳离子交换HPLC纯化，纯度超过97%。QIAGEN提供siRNA是已经退火的，在灭菌重悬缓冲液中，即可进行RNA转染，非常方便。 　 利用试剂盒，自己制备siRNAs或者dsRNA     不管怎么说，化学合成RNA的费用是相当高的，特别是在哺乳动物细胞中siRNAs的效率不一，一般一个基因需要设计3—5对siRNAs以确定最有效的，这样的费用就高了（就是6—10条siRNAs，一个基因就不少于1500USD）。如果需要重复设计，在国内还有时间上的困扰。现在，多个厂家推出了不同的试剂盒，一个试剂盒可以自行设计合成多个siRNAs,灵活性和可控性都明显提高，不失为一种经济的选择。生物通在这里为你一一介绍。（待续，参见后文） 　  相关文章 RNAi——回顾 siRNAs的设计和设计工具 如何寻找siRNAs的目标靶位点 成功的siRNAs实验必读：10条黄金准则