RNA干扰技术（详细资料参考生物通RNAi专题）已经成为研究基因功能的有力工具。任何一个RNA
interference实验的成功都有赖于：
1.高质量的siRNA（或者是siRNA表达工具，比如质粒，PCR片断等）
2.有效的转染试剂。
生物通早前已经介绍过制备siRNA的5种方法的比较（RNAi：制备siRNAs的5种方法——如何选择最适合你的方法），大家可以从中寻找适合自己需要的方法。转染试剂的选择对于利用siRNA介导的基因沉默实验来说同样是至关重要的。没有高效的转染，siRNA就不能有效的引发相应的细胞响应，会直接影响同一siRNA的抑制效果。只有将siRNA高效转染哺乳动物细胞，才能更真实的检测siRNA干扰基因表达的效果。
如何选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子。常见的转染试剂包括脂质体和多胺类的试剂，主要是为双链DNA转染而设计的。转染质粒DNA的最佳试剂往往不适合siRNA的转染，反之亦然。适合于质粒DNA转染用的转染试剂往往也不适合siRNA表达框（SECs: PCR fragments expressing
siRNAs，参考RNAi：制备siRNAs的5种方法——如何选择最适合你的方法）的转染。随着RNAi技术越来越受重视，各厂家纷纷推出了自己的RNAi转染试剂。在这里，生物通为您搜罗了多种同类产品的信息参数和价格，甚至操作手册，方便您进行比较和选择。
一：siRNA专用转染试剂
（二：质粒和PCR片断专用转染试剂）
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产品名：RNAiFect Transfection Reagent
厂家：Qiagen
优点：高效低毒；适用细胞广泛；即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染，操作格外简单方便
简介：siRNA的转染是基因沉默实验中关键的一步。RNAiFect是一种基于脂质的转染试剂，专门用于siRNA转染，确保没有RNAse活性。传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。由于RNAiFect的内毒素和细胞毒性都非常之低，加上转染复合物能够高效的在完全培养基中形成，因而整个转染过程可以在含血清而且是含有抗生素的培养基中操作，无需更换培养基，这极大的方便转染操作！该试剂可以耐受较高浓度的siRNA转染而不引起细胞毒性，能够得到更好的抑制效果，适用于包括AGS,
HEK-293, HeLaS3, Huh-7, HUVEC, NIH-3T3, and mouse embryonic fibroblasts cells在内的多种真核细胞。
| 操作流程： |
1.用含有抗生素和血清的培养基，或者是附带的Buffer
EC-R稀释siRNA |
| 2.加入RNAiFect转染试剂，在室温下混合并孵育10—15分钟 |
| 3.加入培养细胞中即可。24—48小时后检测siRNA的干扰效果。 |
参考数据：
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HeLa-S3 cells were plated out in
24-well plates at a density of 6 x 104
cells in each well, 24 hours after transfection. Cells were transfected
with lamin A/C siRNA using the transfection reagents indicated, according
to the manufacturer’s protocol. mRNA was purified from the cells 48
hours after transfection and quantitative RT-PCR was performed using the
QuantiTect SYBR Green RT-PCR Kit with primers targeted to lamin A/C and
GAPDH. Expression of the lamin A/C gene was normalized to the expression
of GAPDH and quantified using a standard curve prepared from known amounts
of cDNA purified from HeLa-S3 cells. |
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Cells were transfected and LDH
activity in the cell culture supernatants was tested 48 hours later, using
a colorimetric assay according to the manufacturer’s protocol. LDH
activity in the cell culture supernatant of untransfected cells lysed by
detergent was set to 100%. Background LDH activity was measured in
untransfected and untreated cells, and this value was subtracted from all
other measurements. |
订货信息（点击产品名可以直接在生物通商城订货）：
操作手册：RNAiFect Transfection Reagent
操作手册
综合指数：（最高 5 星）
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产品名：TransMessenger Transfection Reagent
厂家：Qiagen
优点：高效转染；RNA专用即用型试剂；
简介：TransMessenger是第一个专门为转染RNA而设计的非脂质体的脂质型的转染试剂。没有RNase活性，内毒素≤10
EU/ml，经严格设计去除所有可能降低RNA转染效率的成分，确保高效转染。独特的缓冲液促进RNA聚集，经脂质体包装成为高效转染复合物。适用于包括293, BSC-1, MA104,
MRC, Primary cortical and hippocampal cells,
TRM-6 and TRM-6/PDX-1 cells, TU7D, Vero在内的多种细胞。
操作流程：将RNA和Enhancer R，Buffer EC-R室温混合5分钟，加入TransMessenger Reagent室温孵育5—10分钟，加入培养基混合后加入细胞中，再温育培养3小时，更换培养基继续培养直到检测。
操作手册
TransMessenger™
Transfection Reagent Handbook (PDF version, 83 KB)
订货信息（点击产品名可以直接在生物通商城订货）：
综合指数：（最高 5 星）
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产品名：The Silencer siRNA Transfection Kit:
siPORT™ Amine
和 siPORT™ Lipid
厂家：Ambion
优点：专为siRNA转染不同细胞类型而设计
简介：目前主流的转染试剂类型主要是脂质类和多胺类两种，由于不同的细胞“偏爱”不同类型的转染试剂，因而对不同的细胞株的转染效率可能大相径庭，另外转染效率也和被转染的大分子类型有关（dsDNA,
RNA, dsRNA, Oligo...）。siPORT Amine (a polyamine
mixture) 和 siPORT Lipid (a mixture of cationic and neutral lipids)是专门为siRNA转染哺乳动物细胞而设计的。正如前面提到的，两种不同的类型对不同的细胞株有不同的表现：例如
siPORT Lipid
转染Hela的效率明显更高，而
siPORT Amine 更适合转染293细胞。两种转染试剂的细胞毒性都很低，非常适合转染包括化学合成的siRNA，以及体外转录或者长片断双链RNA由RNAseIII/Dicer酶降解制备的siRNA库在内的小分子RNA。The Silencer siRNA Transfection Kit中分别提供了这两种不同类型的转染试剂，方便实验人员在遇到各种细胞株时都可以分别尝试两种试剂，找到最适合的转染产品和方法，因而适用范围更宽。另外试剂盒提供针对GAPDH的siRNA的正负对照，用来检测转染的情况，比较适合初次使用。试剂盒的组分也有单独提供的。
操作流程：用OPTI-MEM I reduced serum
medium（Gibco）培养基稀释转染试剂，室温孵育10—30分钟，加入siRNA，再室温孵育15—20分钟。（洗细胞）加入培养细胞中，4小时后加普通培养基(e.g. DMEM with 10%
FBS)继续培养直到检测。
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Figure 4. Delivery
of siRNA by siPORT Lipid and siPORT Amine Induces RNAi.
The indicated cell types were
transfected with GAPDH
siRNA or negative control siRNA using either siPORT Amine
or siPORT Lipid Transfection Agent. Bars indicate gene expression levels 48 hours after delivery
of the gene-specific siRNA relative to negative control wells.
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订货信息（点击产品名可以直接在生物通商城订货）：
操作手册：siPORT™ Amine
和 siPORT™ Lipid
操作手册
综合指数：（最高 5 星）
| 方便程度： |
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| 适用范围： |
（两种试剂各有所长，相互补充） |
| 价格： |
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产品名： GeneEraser™ siRNA
Transfection Reagent
厂家：Stratagene
优点：专门为siRNA转染多种细胞而设计，高效转染，只需低浓度siRNA；毒性更小，操作简便；
简介: RNAi实验要求专门为siRNA转染而优化的转染试剂，GeneEraser正是这样一个产品，可以高效直接将siRNA运送到细胞质中以便和mRNA结合并引发mRNA降解，只需要很低浓度的siRNA就可以使特定的基因表达沉默。在Hela细胞中的转染效率可高达95%—100%。相比很多阳离子脂质体转染试剂，GeneEraaser低毒性可以显著减少对细胞的伤害。适用于包括CHO-K1，NIH/3T3，HT-29，A549，293，Hela，Monkey Kidney在内的多种细胞。可以在有血清的培养基中转染，无需更换培养基。
操作流程：用无血清培养基稀释GeneEraser，室温孵育5—15分钟，加入siRNA再室温孵育5—15分钟；将转染复合物加入刚刚更换新鲜培养基(含血清)的细胞中，继续培养直到检测。
操作手册：GeneEraser™ siRNA
Transfection Reagent手册
订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购
:-)
综合指数：（最高 5 星）
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产品名：Lipofectamine™ 2000
Transfection Reagent
厂家： Invitrogen
优点：高效低毒，耐血清，易于操作，适用范围广
简介：Lipofectamine™ 2000是Invitrogen公司著名的DNA转染试剂，在RNAi技术日益普及的今天，Invitrogen公司特地为其推出适用于siRNA转染的Protocol，使之同样能高效转染siRNA。两个关键性特点使得LIPOFECTAMINE 2000试剂的转染步骤快速简便：（1）DNA-阳离子脂质体试剂的复合体可以直接加入到细胞培养基中，以及（2）转染后不需要除去Lipofectamine™ 2000试剂。适用于包括HEK 293,
BHK, CHO-K1,和A549在内的多种细胞。
操作流程：用无血清培养基分别稀释siRNA（20pmol）和Lipofectamine™
2000，室温孵育5分钟后，混合，继续孵育20分钟，直接加入培养细胞中，继续培养直到检测。
操作手册：Lipofectamine™ 2000
Transfection Reagent用于siRNA转染的流程
订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购
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综合指数：（最高 5 星）
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产品名：RiboJuice™ siRNA Transfection
Reagent
厂家：Novagen
简介：专门为siRNA转染优化设计的转染试剂，高效转染，低毒设计，适用于包括Neuro-2A，
BHK，COS-7，MCF-7，NIH，3T3，A549，HeLa，HEK293，CHO，HepG2，L6在内的多种细胞。还可以和DNA转染试剂一起实现siRNA和DNA质粒的共转染，便于衡量转染效果。
操作流程：无血清培养基稀释RiboJuice，静置5分钟后加入siRNA，孵育5—15分钟后直接加入培养细胞中，继续培养直到检测
操作手册：RiboJuice™ siRNA Transfection
Reagent操作手册
订货信息：（点击产品名可直接在生物通商城定购
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综合指数：（最高 5 星）
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据厂家资料显示可以做RNA和Oligo转染还有不少产品，包括：罗氏公司的Fugene
6（这也曾是本人至爱）和DOTAP转染试剂， Promega公司的TransFast和Tfx，Transfetam转染试剂，Invitrogen公司可以用于转染RNA的DMRIE-C转染试剂，和转染寡核苷酸专用的Oligofectamine，也可以用于RNAi实验，但是很遗憾，由于资料不全，没有找到这些产品用于RNAi实验的具体应用，所以我们在此暂时不作介绍。另外还有部分优秀的siRNA专用转染产品本身在国内没有正规的销售渠道所以没有提到，生物通今后会陆续将相关的资料不断补充进来，如果您有相关的使用经验并愿意和大家分享，欢迎提供给我们。
二、siRNA构建质粒和PCR片断转染试剂
产品名：siPORT™ XP-1
厂家：Ambion
简介：号称是RNA公司，也是最早投身RNAi领域并致力生产和推广RNAi相关技术和产品的Ambion公司，率先推出商品化的siRNA表达质粒（可以通过质粒方便的在细胞内表达siRNA）和PCR产物直接转染细胞制备siRNA的方法，同时也为这两种方法提供了专用于siRNA构建质粒和PCR片断的转染试剂siPORT™ XP-1。这个多胺类的转染试剂毒性低，易于使用，能够在有血清的条件下高效的将质粒DNA或者PCR片断转到哺乳动物细胞，不需要更换培养基。多数质粒转染试剂不适合较短的线性DNA的转染，而XP-1是专为SECs和PCR产物转染优化设计的，结果更有保证。
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Figure 3. SECs
Delivered with siPORT XP-1 Induce Gene Silencing. siRNA
Expression Cassettes (SECs) were prepared with the Silencer
Express (Mouse U6) siRNA Expression Cassette Kit and then transfected
into HepG2, COS-7, MCF-7, HeLa, and DU145 cells with siPORT XP-1.
Gene silencing effects were monitored by Northern blot 72 hours after
transfection. Figure 3 shows the use of siPORT XP-1 for
transfecting SECs targeting GAPDH into five different cell lines. GAPDH mRNA
levels were reduced by >90% in three of the five cell lines, and >75% in
the remaining two.
(B)
pSilencer 2.0-U6 was
engineered to express an siRNA to GAPDH and then transfected into
COS-7, HeLa and DU145 cells with siPORT XP-1. 72 hours after
transfection, RNA was isolated and GAPDH mRNA levels were
analyzed by Northern blot
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操作流程：无血清培养基稀释转染试剂，静置5-20分钟后加入DNA或者PCR片断，孵育5—20分钟后直接加入培养细胞中，继续培养直到检测。
操作手册：siPORT™ XP-1操作手册
订货信息：（暂时未有价格
:-)
| 产品 |
货号 |
描述 |
| siPORT XP-1 （0.4ml） |
4605 |
24孔板转染可用200次以上 |
在本次测评中综合指数没有转染效率一项，原因是根据各厂家的阐述很难评出其差别，siRNA抑制基因表达本来就是一个和试剂量有关的过程，不同的细胞株，不同基因，不同的siRNA和不同的siRNA量，不同的操作都会影响实验的结果。有的转染试剂“耐受”RNA少，或者说载量较小，要增加siRNA的量就要相应增加转染试剂的量，影响转染，有的试剂可以承载较多的RNA，容易得到较好的结果，因而难以客观的评价。很少有实验室能有机会“用遍”各种产品。不过不同的实验室会选择不同的产品，有自己的使用心得，如果能将这些心得汇集起来，对于后来的新手将是非常实用的参考。如果您已经使用过其中一种或者其中几种产品，并愿意将使用心得和大家一起分享，欢迎联系我们：
info@ebiotrade.com。我们随后还将尝试征集一些实验室自愿无偿试用这些产品，给大家更真实全面的用户参考。
要成功的进行siRNA的转染实验，除了要选择适合的转染试剂外，还需要对实验条件进行优化，包括siRNA浓度，质量，细胞密度，血清的浓度以及转染试剂的量。生物通将随后推出文章，就siRNA浓度，质量，细胞密度，血清以及转染试剂的量对转染过程的影响进行探讨，欢迎关注。
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