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纯化、浓缩蛋白与核酸样品的D-tube
【字体: 大 中 小 】 时间:2005年11月14日 来源:生物通
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生物通报道:在制作蛋白样品的时候透析可以说是最常用的方法,此法简单,所需的试剂也很常见并便宜。古老一点的方法呢就是买回固定规格的透析袋,用绳子绑住两头,当然,在那之前记得把样品放进去。完了放到不同浓度的溶液中,利用渗透压不同的原理将蛋白样品中的尿素等小分子杂质去除。这种方法太慢了,少说也要6、7个小时,动不动就是overnight。于是有了电洗脱,把透析袋放在电泳液中,一通电,让分子定向移动,这样速度就可以提高许多。
最近发现,把pET原核表达做成王牌的Novagen推出了一种将这一过程完全商业化的产品,这就是D-tube。D-tube样如其名,就是一个EP管的样子,里面是透析材料制成的内层,可以处理10-3000μl的样品。D-tube不但可以去杂质,也可以进行纯化。其原理是将总样品进行电泳,对目的条带切割后利用D-tube进行去杂质和浓缩。利用这种方法不但可以对丙稀酰胺电泳胶中的蛋白进行处理,还可以对琼脂糖胶(丙稀酰胺胶当然也行)中的DNA、RNA,甚至是蛋白-蛋白或者蛋白-DNA复合物进行纯化和浓缩。
将D-tube放到固定架上
放入电泳槽中进行电泳
利用电洗脱可以将蛋白与核酸样品中的杂质去除,并且达到浓缩样品的目的。利用D-tube不会造成样品损失,可以快速达到高产率的效果(生物通记者 谢菲)。