多姿多彩的质粒提取世界——终结篇[选购宝典]

【字体: 时间:2005年07月15日 来源:生物通

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生物通技术专评:这几周对国内、外品牌的质粒提取试剂盒都做了详细的介绍,现在也到了say good-bye的时候了。可是我突然想起,有几个值得推荐的品牌还没提呢,于是我又打开电脑,完成了这部终结篇。

 

Stratagene

    冷泉港是分子生物学特别是核酸领域的圣地,Stratagene一直为每年冷泉港的学习班供应产品,当然得有过硬的招牌和质量。在核酸纯化领域Stratagene的产品少而精,比如很有口碑的极微量细胞RNA提取试剂盒是第一个可以提取单细胞RNA的试剂盒。Stratagene的质粒纯化试剂盒就2个,一个StrataPrepMinprep,看起来似乎是普通的离心式快速质粒纯化试剂盒,但是特别之处不可不提:普通的硅胶膜快速离心纯化试剂盒一般不适合做大质粒纯化,超过10Kb的质粒就不容易洗脱,所以厂家都会建议用阴离子交换柱。而另一类要自己加纯化介质的快速离心纯化Kit呢(比较灵活那种),由于纯化介质小而松散,在离心或者抽滤过程中必然会发生位置相对移动,容易“扯断”所吸附的较长的DNAStrataPrepMinprep硅纤维膜可以纯化高达45kb的粘粒而不影响得率。厉害吧?StrataPrep公开宣布所得纯化质粒OD260/2801.8-2.0间,相当自信。如果需要快速纯化超大重量级质粒,StrataPrep无人能及。就是价格实在辣。另外一个精品是去内毒素的Strataprep EF Midiprep。当年Qiagen首推市面上独一无二的去内毒素产品后风光无限, Stratagene随后就推出了这个EF系列,也是一样的利用专门的去内毒素试剂,Stratagene的特色在于它有个颜色指示剂可以提示去内毒素的情况,而且它避免采用阴离子交换柱,而是采用快速离心柱,同样可以达到<0.1EU/ugDNA的转染级别质粒,而且一次纯化最大载量绝对惊人:350ug!加上同样可以纯化分子量高达48kb的巨型质粒――记住啦,当且仅当你有这种需要的时候,价格向来很辣的Stratagene还是真正划算的。(如果碰上特价就要抓紧屯一个了,留意生物通特价专栏可以掌握特价动向。)

 

Novagen

       如果做过原核表达一定会知道NovagenpET系列,如果你不知道Novagen,那么你也至少应该知道它的母公司默克MerckNovagen的质粒提取系列有一般的离心型Mini提取,也有转染纯度的MidiMaxi级别的质粒提取试剂盒。Novagen采用的Mobius™专利技术,它采用了高容量的Fractogel®树脂为原料,比起以硅胶为基础的离子交换技术,Mobius的离子交换介质能更强吸附DNA并且更好的去除内毒素等杂质。UltraMobius是最高级别的超纯系列,所得超纯质粒内毒素<0.02EU/ugDNA!――可用于显微注射和DNA免疫等要求比转染更严格的应用上。Mobius阴离子交换树脂系列可以制备转染级别的质粒。有趣的是Novagen虽然宣称其质粒纯化系列适合120kb的质粒,但同时说明这是由于用阴离子交换层析法纯化长核酸片断方法受专利保护――言下之意大概是说我的产品技术上不是不能纯化更大质粒,而是没有买这个专利许可,所以不能说,嘿嘿!

 

       同时Novagen有针对自己的原核表达载体pET而专门出的Mobius™ 500 pET Plasmid KitpET系列载体本身采用低拷贝的pBR322 复制起点,所以产率偏低,可能需要更多的细菌,更多的Buffer,对于低拷贝质粒可以尝试用一下他们专门为pET设计的产品。

 

Roche

       我想写生物分子这块总不能遗漏了罗氏这个响亮的招牌,想当年罗氏并构了宝灵曼公司,一跃成为分子诊断这行的老大,何等风光,到现在为止它在医药、分子诊断这些领域都.是世界领先地位的。地高辛和Fugene 6依然延续了宝灵曼的独到之处。曾经罗氏的质粒提取试剂盒在中国也是非常有市场的,并且它的产品质量也是非常有保证的,不过近几年罗氏的产品重心似乎没有放在这一块。

       罗氏质粒提取试剂盒根据纯度可分为GenopureHigh Pure,根据提取量分为MiniMidiMaxi

产品名

产率

时间

使用技术

用途

High Pure Plasmid Isolation Kit

12μg

30min

硅吸附

体外转录、克隆、测序、酶切等

Genopure Plasmid Midi Kit

>85μg

60min

阴离子层析

Southern杂交、测序、克隆等

Genopure Plasmid Maxi Kit

>420μg

75min

阴离子层析

Southern杂交、测序、克隆等

       从目录上看,罗氏做产品还是十分用心的,High Pure Plasmid Isolation Kit的测评报告找来六个学生用不同菌株进行质粒提取,对质粒的得率、纯度、所需时间、测序长度、酶切反应都一一进行测试,给人感觉十分诚恳、务实,不会哗众取宠。

 

Eppendorf

从无人不知无人不用的eppendorf离心指管,到市场占有率甚高的离心机,eppendorf开始步入中国市场。2年前推出了9分钟快速离心质粒提取试剂盒,算是众多小规模质粒提取试剂盒中比较有新意的设计。和传统的碱裂解法不同,FastPlasmid利用酶在细菌的细胞壁上打洞,3分钟内一步裂解得到澄清无粘性的上清直接上柱,离心吸附后清洗,最后洗脱。方法是挺新颖,可惜多数人用时都有点贪心――总希望多收一点菌,得率高一些,偏偏这个方法最忌细菌过量――因为酶的消化能力是有限的,过量收菌往往导致得率反而不佳。PerFectprep也属于类似需要自己手动加填料的快速离心纯化方法,加多加少比较灵活。

 

Omega Bio-tek

       Omega Bio-tek的产品在所有的外国产品中算是便宜的,在质量上也算物有所值,在产品设计上也基本照顾到各个层面,有常规系列,有为了DNA疫苗、哺乳动物转染等的超纯系列和无内毒素系列,方便快捷的注射器系列。它所有的产品使用的Hibind®Q柱、S柱和V柱。其差别在于Q柱无盖,S柱有盖,V柱有盖且可用真空抽吸代替离心,V柱比Q柱贵约10%

      

Millipore也有几款Mini型的质粒提取kit,都是为了自动化操作设计的96孔板模式,价格很不错,就是产率有限。最近收购了ClontechTakara大连宝生物公司也出有一款Mini型的质粒提取kitSigma似乎也出了产品来犯这一趟混水。喜欢尝试不同东西的研究人员们可以去试试这些产品。

      

质粒提取从当初手工的碱裂解法和煮沸法,到今天的阴离子交换柱、真空抽滤以及高通量的机械操作,发展是十分迅速且惊人的。分离所用的材料也从当初的硅胶膜吸附,到现在的树脂,离子交换,磁珠等。硅胶膜可以算是经济又实惠的选择,纯化效果又好,成本也低;但是限于膜的厚度,在大量提取的时候一般都不采用硅胶膜。一般公司在做MegaGiga级别的产品时大多采用阴离子交换技术。刚开始做大规模提取是采用重力滴落,慢慢等溶液流下来,后来人们觉得那样也太傻冒了,于是设计了配套的真空抽滤装置。当然有好就也有又不好,如果抽滤速度过快产生的物理剪切力对质粒还是有所影响的,各种的优缺点需要客户自己斟酌。

 

在所有品牌中Qiagen可以说是当之无愧的行业老大,其它公司如果有哪个产品质量可以超过它那就一定要写在产品说明里,因为这代表着这款产品超过了高端的行业标准。Qiagen的产品从高通量测序使用的96孔板系列以及配套的机械操作台,到用于基因治疗、转染哺乳动物细胞的超纯、无内毒素系列,还有方便快捷、不需要常规离心步骤的针筒设计试剂盒都应有尽有。如果你是要进行基因治疗、DNA疫苗、原代细胞转染等操作,那么还是推荐你使用Qiagen的产品。当然一分钱,一分货,Qiagen的产品的价格每次看到都让人心跳加速,就算经费不是那么紧张的实验室也要思前想后一番再做决定。但是Qiagen的产品一次投资后可反复使用,上柱的溶液可以自己配,这样算下来即保证了质量,价格也是合理的(厂家可是不推荐的!那要影响销量的。不过某些实验室里确实有将用过的柱子消毒重复使用的传统,嘿嘿)。

 

如果是一般转染级别的中量提取那么就一定要提PromegaPureYield™试剂盒了。它仅需30分钟就可以从50ml细菌培养液中纯化出200μg转染级的质粒DNA250ml菌液则可纯化出400μg质粒DNA!它的产率比Qiagen200μgInvitrogen150μg还要多(要知道这两家公司的产率已经不低了)。并且采用了一种独特的洗液,可减少内毒素、蛋白质和RNA污染,提供可靠的转染结果。简单的操作规程,省去了高速离心,重力滴落柱的使用和洗脱后的酒精沉淀步骤。容量高达350ug,去内毒素、而且可以纯化48kb巨无霸质粒的Strataprep EF Midiprep也是一种快速简便的好选择,只是价格比较辣。

 

如果是小提的试剂盒,Invitrogen公司有一款产品比较突出,那就是PureLink™ HQ Mini Plasmid DNA Purication Kit,它采用的是修饰后的硅胶作为吸附材料。一看是硅胶就知道会相对便宜,而用这种修饰后的硅胶提取的质粒在纯度上可以与用阴离子交换技术提取的一争天下。Invitrogen产品的说明就专门提到:这款快速提取的质粒也可以用于转染!并且它提取产率是十分高的,可以达到60μg,这就快赶上普通的Midi级别了,而国产kit更普遍只有20μg左右。

 

讲了这么多都是转染用途的,当然如果你觉得要保证下一步实验的高质量,一般的分子生物学操作如酶切、PCR、体外转录等也可以用这些产品稳定、质量可靠的国外品牌。不过,估计很多老板或者实验室的管理老师都会对你进行爱国的教育,国家的钱不容易啊!那么一般的分子生物学操作你也可以采用许多国产品牌,这样即支持了中国的经济发展也为实验室节省了开销。

 

大多国产品牌都是采用硅胶膜技术,所以产率不会非常高,而且产品的种类也不是十分多,但是作为一般分子生物学操作也足够了。像北京天为时代等国产品牌,许多人用完之后都认为并没有比外国品牌差。

 

好啦,这几个礼拜以来也罗嗦很多了,就此打住。希望各位都能找到适合自己的产品,并且顺利地完成实验。有任何疑问与建议欢迎到生物通BBS进行讨论!

作者 谢菲  校对 吴青
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