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Western Blotting前传:想成为高手吗?[心得点评]

【字体: www.ebiotrade.com 时间:2005年08月24日 来源:生物通

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  不断的会听到有人说“怎么办,就要毕业了,我的Western blotting 还没有结果,如何能毕业啊”。确实,许多专业方向是生物化学,还有分子生物学或是植物,动物学专业的同学,只要是他们在毕业论文设计当中有涉及到下游蛋白方面的,Western blot结果就是一个必须的毕业结果,如果没有一个漂亮准确的Wb结果,许多论文就不够“perfect”,甚至不能毕业。

但是Wb结果有时候就是千呼万唤也不出来,出来了还犹抱琵琶半遮面,真是急煞了一旁等结果的人。仔细想想,其实Wb没有理想的结果原因很多,比如说本身实验设计不合理,上游载体构建方面的问题,蛋白表达假阳性,蛋白抗原被封闭或是Wb本身操作不规范等等许多问题,正如约翰·埃迪塞尔教授所说的“让我们把蛋白质看作具有独特而奇妙性质的实体”,相对于上游操作而言,下游蛋白表达或纯化方面有时确实是显得复杂的多。但是科技的进步就是有这点好处,你有什么样的需要,科学技术可以尽量帮你满足。在生物实验这个领域更是如此,所以当你排除了各种想得到的人为因素之后,埋头苦思冥想:到底我的实验哪儿出了错,为什么就是得不到我想要的Wb结果时,一定要抬起头来,看看到底新技术能帮到你什么,而不要一条胡同走到底,浪费了时间和金钱,更重要的是打击了自己对于实验的自信心和兴趣!

那么到底新技术能帮到我什么呢?真的可以让我得到可靠的结果吗?学生物的理科生反应迅速,马上就会问到。坦白说,要笼统的回答这个问题显然是不可能的,只有对症下药才能帮到我们解决问题。比如说,有些产品像Invitrogen公司的InVision His-tag凝胶染色剂,就根本不需要Western印迹,直接就可以在凝胶中显色,这就从根本上解决了Western问题,当然这也有其局限性,仅限于带有His-tag的融合蛋白。再比如Pierce公司的经典作品SuperSignal系列有West Femto级别的发光底物,灵敏度高达10—14,是目前为止已知的最灵敏的底物,也就是说,即使你的蛋白只有皮克量的表达,也可以通过这一产品得以检测。

Western印迹在我们生化操作中是一个里程碑,作用相当重要,做出一个Wb结果说明实验已经由DNA水平转到蛋白水平了,因为通过它的证明,我们确定之前的DNA操作基本正确,可以由此展开下游的表达条件摸索,蛋白纯化或性质分析等了,这也就是为什么当你投稿核心期刊时,只要是蛋白鉴定方面,大部分期刊都要求有Wb结果。因此就是只冲这一点,我们也应该在做Wb之前,仔细考虑下有什么好的技术,什么好的产品我们能用得上的,千万不可瞎冲瞎闯,只有将严谨的科研态度与好的实验手段结合起来,我们才能得到于自己满意,于科学发展有益的实验结果。(生物通作者:张迪)

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