基因工程技术打造神奇链亲和素 |
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小】 www.ebiotrade.com 时间：2005年08月05日 来源：《自然-方法学》 ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------ |
摘要： |
基因工程改造获得的链亲和素变异体能以超强力量与生物素-4-荧光素结合，然而，这种键的亲和力是可逆转的。
链亲和素是一种四聚体蛋白质，它与生物素之间有超强的非共价键相互作用，从而让这种小分子—蛋白质对成为亲和标记中最为实用和用途最为广泛的系统。Charles Cantor从事该系统研究已有20年的时间，他说：“这是所有生物学中最好的配体-蛋白质结合对。”
Cantor的实验室最近研制出一种具有广泛生物素键亲和力，同时经过基因工程，将正常的蛋白四聚体改造为一种稳定的单链二聚体，适合在抗菌素和芯片上展示。链亲和素是由四条单链组成的两个二聚体通过界面间的强相互作用而形成。以前的研究曾试图使用转基因方法破坏两个二聚体间的作用，从而得到稳定的二聚体，但代价是失去生物素键亲和力。而最为特别的是，链亲和素的键结合部位是由两个二聚体的部分共同组成的，因此，当四聚体被打破时，只会失去部分生物素键结合区域。
因为键亲和力的减少，研究人员希望通过基因工程的方法制造具有更广泛生物素亲和力的链亲和素变异体。但结果出人意料，Cantor的小组发现了令人吃惊的结果：这种变异体与生物素-4-荧光素(B4F)的结合力比它们与生物素结合力强10万倍。
与传统系统不一样，这些新的链亲和素变异体非常便于使用，因为它们与B4F的结合是可逆转的。Cantor解释说，链亲和素与生物素的结合力是如此之强，一旦结合后，你就很难解除这种结合力。与生物素相比，链亲和素变异体更喜欢与B4F发生相互作用，但加入过量的生物素则会破坏B4F-链亲和素间的相互作用。Cantor说，这种拥有超强但可逆转的键亲和力的全新亲和标记在许多领域都将有实际的用途，它们会让更为复杂的生物素-链亲和素阵列成为可能。
注：亦农译自2005年第八期的《自然-方法学》，版权为英国NPG出版集团所有。
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