上千篇文献报道的蛋白研究关键技术

　　

生物通报道：1991年的早夏，来自海德尔堡大学的Renato Paro实验室的博士后Valerio Orlando开始了一项确定在体内蛋白质与染色质结合的位置的研究。研究者们已经解决了在体外怎么确定一种特定的蛋白是否会与一种特定的序列结合的问题。但是在活细胞内是怎样的情形呢？

Orlando 和Paro的想法很简单。先用甲醛交联蛋白质—DNA复合体（protein-DNA complexes），用复合体里目的蛋白的抗体将其免疫共沉淀，逆转这种复合体交联释放并纯化DNA，然后用该DNA作为探针进行Southern blot检测潜在的结合位点。但是这种chromatin immunoprecipitation (ChIP)技术表现得不是十分的好，Paro说：“在交联和免疫共沉淀之后，我们意识到了我们得到的DNA所剩无几，可能剩下的量不足以进行Southern杂交。”所以在1992年6月1日，两人讨论在整个操作流程中加进一步PCR扩增。这个可以在Orlando实验记录中看到。

“ 扩增DNA材料不是ChIP流程中至关重要的一步。” Paro说。Orlando 和Paro第一次用这个技术获得了果蝇bithorax complex里的Polycomb-binding序列图谱。１９９３年３月１９　日对插入物进行Southern印迹分析，Orlando 和Paro由于没有优化条件，所以他们得到了具有载体序列背景的结果，在大部分泳道中可以看到高分子量的双带型。他们在那年的《Cell》(75:1187-98, 1993).上发表了他们的结果。

今天，超过2,400篇文献报道用过ChIP技术，在研究染色体重建中，它已经成为一种关键的技术。许多研究者通过改变原始的操作流程，用只询问某一特定序列的是否存在的步骤代替了全局扩增，但现在当ChIP技术与微阵列（microarray）技术一起应用时，全局扩增步骤又重新出现了。Paro说：“旧东西又是新的了。”
（生物通：亚历）