中科院海洋所获“基因重组表达方法”专利

　　

生物通综合：由中科院海洋所研究员宋林生等完成的“黑鲷肿瘤坏死因子α基因的重组表达方法”于日前获国家发明专利授权(专利号：ZL200410050331.2)。该项发明涉及分子生物学技术领域，是黑鲷肿瘤坏死因子α(BS  TNFα)基因的体外表达与纯化技术，包括重组表达载体的构建、转化、转化子筛选和表达产物的分离纯化和鉴定等技术环节。其中重组体的构建是根据黑鲷肿瘤坏死因子。预测成熟肽的cDNA序列设计引物，引入两个不同的限制性内切酶突变位点，然后克隆到表达载体，再将构建成的重组表达载体转化大肠杆菌和酵母，筛选阳性克隆并以IPTG或甲醇诱导重组蛋白的表达。

利用亲和层析对表达产物进行多级纯化，获得高纯度体外表达的重组肿瘤坏死因子α。该产品可用于鱼类免疫机制的理论研究，也可作为饵料添加剂、免疫增强剂、病害防治药物等在生产方面进行应用。

目前，水产养殖动物高密度、集约化的快速发展，使得养殖病害日趋严重，各种病害频繁爆发，已成为水产养殖业可持续健康发展的主要瓶颈。各类农药、抗生素盲目无序和频繁使用，不仅对病害的预防与治疗没有起到明显作用，而且，由于这些药物的大量使用严重破坏了自然生态环境，药品的残留已经直接威胁到人类的健康，因此，发现和寻找通用性强、防治效果好、广谱无污染的新型病害预防和治疗药物，成为人们亟待解决的重要课题之一。

 

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核-吞噬细胞产生的单核因子，不仅具有选择性地杀伤某些肿瘤细胞，而且有多种免疫调节作用。人TNF-α基因编码前体蛋白，其信号肽将前体蛋白固定在细胞膜上，成为具有活性的跨膜干扰素(TNF)，分子质量为26×103，经酶切去除信号肽生成分泌型TNF-α，分子质量为17×103。TNF-α具有广泛的生物学活性，如：参与炎性反应和免疫应答，抗肿瘤，参与内毒素性休克等病理过程，引起恶病质等。其具有双重作用，,一方面在机体免疫调节，机体生理功能和抗感染等方面发挥重要作用，另一方面若持续释放或产生过多则会引起发热!、休克、恶病质等，同时TNF-α可进一步诱导IL-6、IL-8、IL-10等细胞因子的产生，这些促炎性细胞因子参与体内急性反应、发热反应、引起趋化肽释放等，还可使内皮细胞活化而导致血管通透性增加。

 

宋林生，男， 1966 年出生，研究员、博士生导师。毕业于南开大学生化与分子生物学系，获遗传学博士学位。目前主要从事海洋生物的分子遗传学、分子系统学、分子免疫学、海洋微生物学以及海水养殖动物病害防治等领域的研究，先后主持承担了 973 项目“扇贝生物种群遗传结构及遗传多样性的应用”（ 1999-2004 ）、“对虾抗病免疫物质应用原理与途径”（ 2006-2011 ）， 863 项目“扇贝抗病重要功能基因的克隆与应用”（ 2002-2005 ）、“重要生产性状关键基因的发掘与应用技术”（ 2006-2011 ）和国家自然科学基金等多项课题，发表相关学术论文 100 余篇，其中 SCI 、 EI 收录论文 40 余篇，参与编写专著6 部。